SDS-PAGE电泳法测定干酪素中酪蛋白组分
课题研究的目的与意义，国内外研究的发展概况和趋势
课题研究的目的与意义
SDS-PAGE电泳是常用的分离蛋白质的方法，其根据蛋白分子亚基的分子量大小将蛋白质分离开，而不受电荷等其他因素的影响。最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由Ornstein(1964)和Davis(1964)设计的,样品和浓缩胶中Tris-HCI(pH 6.8)，上下槽缓冲液含Tris-甘氨酸(pH 8.3)，分离胶中含Tris-HCI(pH 8.8),系统中所有组分都含有0.1%的SDS，样品和浓缩胶中的氯离子形成移动界面的先导边界而甘氨酸分子则组成尾随边界，在移动界面的两边界之间是一电导较低而电位滴度较陡的区域，它推动样品中的蛋白质前移并在分离胶前沿积聚。此处pH值较高，有利于甘氨酸的离子化，所形成的甘氨酸离子穿过堆集的蛋白质并紧随氯离子之后，沿分离胶泳动。从移动界面中解脱后，SDS-蛋白质复合物成一电位和pH值均匀的区带泳动穿过分离胶，并被筛分而依各自的大小得到分离。
SDS与蛋白质结合后引起蛋白质构象的改变。SDS-蛋白质复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状,近似于雪茄烟形状的长椭园棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样(约为18A,即1.8nm)，而长轴则随蛋白质分子量成正比地变化。这样的SDS-蛋白质复合物，在凝胶电泳中的迁移率,不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭园棒的长度也就是蛋白质分子量的函数。
由于SDS和疏基乙醇的作用，蛋白质完全变性和解聚，解离成亚基或单个肽链，因此测定的结果只是亚基或单条肽链的分子量。
SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围取决于用于灌胶的聚丙烯酰胺的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰胺形成毫无价值的粘稠溶液，而经双丙烯酰胺交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加，并形成SDS蛋白质复合物必须通过的小孔。
这些小孔的孔径随“双丙烯酰胺~丙烯酰胺”比率的增加而变小,比率接近1: 20时孔径达到最小值。SDS聚丙烯酰胺凝胶大多按“双丙烯酰胺~丙烯酰胺”为1: 29配制，试验表明它能分离大小相差只有3%的蛋白质。
干酪素，又称酪蛋白朊或酪蛋白，通常是指由牛乳腺分泌的多种(约20种)磷蛋白的混合物，存在于牛奶或干酪中，是等电点为pH4.6的两性蛋白质。干酪素微溶于水，溶于碱液及酸液中，是鲜乳经离心、脱脂、沉淀、干燥等方法生产加工的，颜色呈白色或微黄色的无臭味粉状或颗粒状物料，主要作为食品添加剂或品质改良剂被广泛应用于食品、医药、烟草、化妆品、皮革、轻纺、造纸等行业，是重要的食品、化工原料。
