E10单链抗体的表达纯化和抗原表位分析文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1、拟研究和解决的问题

表皮生长因子受体(EGFR, epidermal growth factor receptor)作为一类细胞信号转导的关键因素，其高表达已被证明与某些肿瘤存在密切关系。相关肿瘤患者预后差，易发生早期转移，复发时间短，复发率高，存活期短。EGFR经过人为干预使之降低后可以明确改善癌症患者预后^[1]。本研究以EGFR胞外区作为药物作用的靶点，拟采用抗体阻断EGFR与其配体结合，达到抑制EGFR介导的相关细胞通路的目的，从而提供一种潜在的肿瘤治疗方案。

本实验将抗EGFR单链抗体E10基因通过分子生物学手段，构建到噬菌体载体pET-22b上，并转入大肠杆菌BL21(DE3)表达，后期通过发酵制备、分离、纯化等过程得到纯度较高的抗体蛋白，并进行SDS-PAGE电泳和western blotting分析。最后利用噬菌体随机十二肽库分析其抗原表位，从而获得其抗原表位图谱，为该抗体的后续研究做好铺垫。

2、采用的研究手段

①抗EGFR单链抗体E10的表达及制备^[2]

构建的重组载体序列中含有pelB信号肽前导序列，其可将表达的单链抗体蛋白导入细菌周质空间，采用渗透压休克法(osmotic shock)提取可溶性抗体蛋白。

②抗EGFR单链抗体E10的纯化

经破壁粗提取得到的抗体蛋白上清液经镍柱吸附洗脱，进一步纯化得到电泳纯蛋白，采用SDS-PAGE电泳和western blotting对蛋白的分子量和装配进行鉴定，并超滤纯化。

③噬菌体随机十二肽库分析抗原抗体表位^[8]。