[开题报告内容]
GABA B1受体条件性基因敲除小鼠鉴定及初步表型分析
[研究的主要目的和意义]
gamma;-氨基丁酸(Y一aminobutyricacid,GABA)是广泛分布于哺乳类动物中枢神经系统内的一种重要的抑制性神经递质,它可与相应的GABA受体结合而发挥抑制和调制作用。现在已知GABA 受体共有 GABAA,GABAB 和 GABAC 三种亚型，其中GABAB 受体又可以分为 GABA B1 和 GABA B2 两种。[1] GABABR是G-蛋白偶联受体(GPCR)家族成员,与代谢性谷氨酰胺受体、钙敏感型受体相关。GABAB 受体是由 GABAB1 (GB1) 亚基和 GABAB2 (GB2) 亚基通过胞内区 C末端的螺旋-螺旋结构域 (coiled-coil domain)偶联而形成的异源二聚体。 在蛋白质结构上， GB1亚基和 GB2亚基都具有位于 N 端胞外区的类似扑蝇夹的结构 (Venus Fly-trap， VFT)、 七次跨膜螺旋结构域、 连接跨膜区的 3 个胞外绊环和 3 个胞内绊环以及位于 C 端胞内区的螺旋 - 螺旋结构域[2]。GABABIR的C末端与BZR的多肤链以1:l的比例结合形成完整的GABABR[3],其中GABABIR存在GABA结合位点,虽然GABABZR单独存在时仍能形成功能位点,但只有存在GABABIR才能产生效应'。
观察GABA在肝脏中对糖和脂类代谢的影响，进而研究GABA在肝脏中的作用是否与糖尿病的发生有关。
条件性基因敲除
（1）Cre-loxP 技术
Cre 重组酶是来源于噬菌体P1中一个编码38kD的蛋白质，属于位点特异性重组酶。它能识别 34bp的部分回文的loxP序列，并能介导两个loxP位点之间的序列发生特异性的重组或删除。LoxP的方向和位置不同，Cre重组酶介导产生不相同的重组产物。当两个loxP序列方向相同并且位于同一条染色体上时，Cre重组酶将相同方向的loxP位点之间的核苷酸序列切除成为游离态。当两个LoxP的序列相反时，Cre重组酶使两个loxP序列颠倒。并且这两种反应处于一种平衡状态。该特性从而使得Cre-Loxp系统广泛用于条件性基因敲除的研究。
Cre-loxP技术示意图
Cre-Loxp 介导的条件基因打靶动物模型需要以下途径：1.用 Cre 表达载体转染含有 Loxp 位点的胚胎干细胞。2.利用显微注射法将 Cre 表达载体注入含 Loxp 位点的受精卵细胞 3.基因中表达 Cre 重组酶的小鼠与基因组中引入 loxP 序列的小鼠杂交，筛选出双重转基因鼠。[4]
