开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题解决的问题
药用三七作为五加科植物三七的干燥根茎，用于治疗疾病历史悠久，是我国的传统珍贵药材。三七含有的化学成分丰富，主要有效成分是三七皂苷和人参皂苷类，具有滋补强壮、止血、活血化瘀、消肿止痛、抗肝炎、降压、降血脂、降血糖、抗衰老等多方面的药理作用和保健功能，具有广阔的开发前景。但由于三七对生态环境适应性差、地理分布狭窄、生长周期耗时长,且种子寿命极短、保存条件要求苛刻等原因给三七植株的大量繁殖和广泛应用于医药行业带来了困难，因此三七毛状根遗传体系的探索具有重要意义,一方面它能在人为控制条件下大量诱导生成,在短期内生成次级代谢物皂苷;另一方面为三七的繁殖和工业生产提供了技术支持。
- 研究方法和技术路线
研究方法：植物组织培养
技术路线：植株外植体培养：（1）培养菌体：无菌条件下，用接种针挑取保存的含空载体pHB sGFP的发根农杆菌C58C1菌液，于含在添加卡拉霉素（100mg/L）、利福平（100mg/L）和链霉素（40mg/L）的固体LB培养基上划线培养并保存。（2）菌体繁殖：在平板上挑取单斑接种于10ML添加含以上抗生素的LB液体培养基中，200rpm，,28℃振荡培养过夜，菌液浓度OD600值为0.8左右。（3）菌体活化：侵染前，室温下4000rpm离心10min，弃上清液。菌体用1/2MS（添加适量乙酰丁香酮AS）液体培养基悬浮，使菌液OD600=0.4左右，之后继续28℃振荡培养2h。（4）植株外植体消毒：三七植株,自来水冲洗,洗衣粉水中浸泡2~3 h,再用自来水冲净,滤纸吸去植物表面多余水分。分别将三七的叶、叶柄、茎、须根用75%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗2次,在10% NaClO溶液中消毒5~20min。消毒终止后用无菌水冲洗5~6次,滤纸吸干水,切割成不同大小的外植体;（5）植株预培养：剪取三七不同组织部位的无菌外植体，接种到预培养培养基（2,4-D 2ppm/L、KT 0.7ppm/L的MS[4]琼脂培养基添加适量乙酰丁香酮AS，对照组用MS琼脂培养基加适量AS做预培养培养基）上，25℃暗培养2d.（6）植株共培养：侵染前，取出预培养好的外植体，加入活化好的C58C1的1/2MS悬液中浸泡30min，轻轻摇动使外植体与菌液充分接触，倒出悬液，用无菌吸水纸吸干表面余菌，转到共培养培养基1/2MS AS400umol/L中，黑暗下共培养2-3d。（7）脱菌培养：将共培养2d的外植体用无菌水洗3-5遍，转入到脱菌培养基（1/2MS 2,4-D 2ppm/L、KT 0.7ppm/L Cef250mg/L，对照组直接用1/2MS Cef250mg/L，下同），25℃，16h/8h光照培养。（8）20d为一观察阶段，期间每一星期换一次脱菌培养基，即可从外植体边缘切口处长出毛状根。（9）剪取单条毛状根(大约2-3cm)，接种于脱菌培养基1/2MS 2,4-D 2ppm/L、KT 0.7ppm/L Cef250mg/L中 暗培养两周，选择生长快，分枝好的毛状根转入脱菌培养基1/2M 2,4-D 2ppm/L、KT 0.7ppm/L Cef250mg/L中继代筛选，每两周继代培养一次，经过5-6次继代后即可完全脱毒。再将生长良好的三七毛状根转入抗性筛选培养基上（1/2MS培养基 潮霉素）继续暗培养20d左右，用生长良好的毛状根来进行分子鉴定、液体培养、含量测定及基因表达分析。
植株愈伤组织的毛状根遗传转化：去掉组织消毒的步骤，其他操作步骤同上。
三、论文课题研究进度安排
2014年2月24日----3月10日确定选题，查阅文献。
2014年3月10日----3月20日撰写开题报告。
2014年3月20日----4月1日进行调查、收集资料、准备实验材料。
