开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题背景
糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。按病因分为遗传因素和环境因素。糖尿病存在家族发病倾向，1/4～1/2患者有糖尿病家族史。临床上至少有60种以上的遗传综合征可伴有糖尿病。1型糖尿病有多个DNA位点参与发病，其中以HLA抗原基因中DQ位点多态性关系最为密切。在2型糖尿病已发现多种明确的基因突变，如胰岛素基因、胰岛素受体基因、葡萄糖激酶基因、线粒体基因等。进食过多，体力活动减少导致的肥胖是2型糖尿病最主要的环境因素，使具有2型糖尿病遗传易感性的个体容易发病。
糖尿病又分为1型糖尿病和2型糖尿病。1型糖尿病，原名胰岛素依赖型糖尿病，多发生在儿童和青少年，也可发生于各种年龄。起病比较急剧，体内胰岛素绝对不足，容易发生酮症酸中毒，必须用胰岛素治疗才能获得满意疗效，否则将危及生命。2型糖尿病，原名成人发病型糖尿病，多在35～40岁之后发病，占糖尿病患者90%以上。2型糖尿病患者体内产生胰岛素的能力并非完全丧失，有的患者体内胰岛素甚至产生过多，但胰岛素的作用效果较差，因此患者体内的胰岛素是一种相对缺乏，可以通过某些口服药物刺激体内胰岛素的分泌。但到后期仍有一些病人需要使用胰岛素治疗。
目前糖尿病暂无根治的方法，但可以通过多种治疗手段控制好糖尿病，其控制手段主要包括5个方面：糖尿病患者的教育，自我监测血糖，饮食治疗，运动治疗和药物治疗。药物治疗包括口服药物治疗和胰岛素治疗。其中，口服药物包括双胍类药物、磺脲类药物、胰岛素增敏剂、alpha;葡萄糖苷酶抑制剂、格列奈类胰岛素促分泌剂。2型糖尿病患者经饮食控制，运动，降低体重等治疗后，疗效尚不满意者可用磺脲类药物进行治疗。该类药物的降糖机制主要是刺激胰岛素分泌，所以对有一定胰岛功能者疗效较好。对一些发病年龄较轻，体形不胖的糖尿病患者在早期也有一定疗效。在治疗过程中，下列情况属禁忌证：一是严重肝、肾功能不全；二是合并严重感染，创伤及大手术期间，临时改用胰岛素治疗；三是糖尿病酮症、酮症酸中毒期间，临时改用胰岛素治疗；四是糖尿病孕妇，妊娠高血糖对胎儿有致畸形作用，早产、死产发生率高，故应严格控制血糖；五是对磺脲类药物过敏或出现明显不良反应。
格列吡嗪（Glipizide），化学名为5-甲基-N-[2-[4-[[[(环己氨基)羰基]氨基]磺酰基]苯基]乙基]-吡嗪甲酰胺，由美国辉瑞公司研究开发，为第2代磺脲类降血糖药，并有降脂和抗凝血作用。其降血糖作用迅速而强，约为甲苯磺丁脲的1000倍，疗效近似格列苯脲，作用机制是刺激胰岛的beta;细胞，促使胰岛素分泌量增加，同时亦刺激胰岛alpha;细胞使高血糖分泌受抑制。其作用方式和氯磺丙脲相似而毒副作用更低且无致畸现象。其不良反应有：1.较常见的为肠胃道症状(如恶心，上腹胀满)、头痛等，减少剂量即可缓解。2.个别患者可出现皮肤过敏现象。3.偶见低血糖，尤其是年老体弱者、活动过度者、不规则 进食、饮酒或肝功能损害者。4亦偶见造血系统可逆性变化的报道。
格列吡嗪片口服后在胃肠道吸收完全、迅速，30min后即可见血糖明显下降，如与食物同服，吸收可延迟30～40 min，血浆药物浓度达峰时间为1～2h，维持降血糖作用时间8～12h。药物在肝脏代谢，其代谢产物无活性，血浆半衰期为2～4h，血浆蛋白结合率为92%～99%。24h内可排泄药量的97%，3天（72h）内可全部排清，故无或极少因蓄积而产生“低血糖症”的不良反应。
- 要解决的问题
建立快速、准确和灵敏的LC-MS/MS方法，测定人血中的格列吡嗪的浓度，用于合理评价格列吡嗪在人体内的药代动力学特征，为指导临床用药奠定实验基础。
- 可行性分析
液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术自Horning等于70年代进行开创性研究工作以来，经过20多年的发展已趋向成熟，应用日益广泛。它以LC为分离手段，MS为检测手段，集LC的高分分离能力与MS的高灵敏度、高专属性于一体，已成为药物杂质检查、体内药物代谢、代谢产物的药物代谢动力学研究和结构研究等现代药学前沿领域中最强有力的分析工具之一。应用LC-MS连用技术可获得复杂混合物中单一成分的质谱图，大大有利于药物杂质、药物代谢和内源性化合物的分离和鉴定，尤其适用于对血浆样品中的药物浓度进行定量和定性分析。相对LC-MS，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）也是痕量分析领域中的一种最有效的分析技术，它有二级以上的质量分析器串联组成，也是将分离和鉴定融为一体的分析方法，特别适合痕量组分的分离和结构鉴定。在这种多级质量分析模式下，LC-MS/MS的优势有：
- LC-MS/MS有更好的专属性，选择性和灵敏度。
- LC-MS/MS对样品的纯度要求低，可适当的简化样品前处理的程序，缩短分析时间。
- LC-MS/MS的定性功能更加完善，不经可以得到代谢物的质谱图，还可以得到其裂解产物的质谱图，而且通过操作模式的改变可以进行化合物的归属及结构研究。
因此，可以使用LC-MS/MS法较为精确的测定人体血浆中格列吡嗪的浓度，并将该方法应用至格列吡嗪片人体药代动力学的研究。
四、研究方法和内容
