开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题背景
高血压为临床上常见的一种慢性疾病,其病程较长,容易诱发心脑血管疾病、肾脏疾病,需要长期服用降压药物。临床合理用药是提升疗效、控制血压的关键。近些年来,随着人民生活水平的不断提高,老年人口的快速增长,高血压已成为严重危害人类健康的社会公共问题。据世界卫生组织 (WHO) 统计, 2006 年全世界大约有9.72亿人患有高血压或血压偏高。每年约有1700 万人死于因高血压导致的各种心血管疾病。中国是唯一一个老年人口超过1亿的国家,据统计,中国高血压患者超过2亿,占全球高血压患者总人数的1/5。高血压诱导的机械牵拉作用是造成血管壁结构与功能改变即血管重构的重要因素之一。过去人们普遍认为临床上降压药物,主要是通过降低血压进而减少机械力对管壁作用而发挥治疗作用,这种作用强调了药物间接阻断机械力对血管的作用。
钙通道阻滞剂钙通道是细胞膜上对Ca具有高度选择性通透能力的亲水性孔道。Ca通过钙通道进入细胞内,参与细胞跨膜信号转导,介导兴奋-收缩耦联和兴奋- 分泌耦联,维持细胞正常形态和功能完整性、调节血管血管平滑肌的舒缩活动等。 一旦细胞内钙超载,将引发一系列的病理生理过程,如高血压等。CCB作为抗高血压治疗药物已用于临床多年,其卓越的降压疗效、广泛的联合降压潜能、优越的心脑血管保护作用使其在当今的的抗高血压治疗、降低心脑血管疾病发病率及死亡率方面占有重要地位。
硝苯地平（Nifedipine,NP）亦称为“心痛定”,化学式为C17H18N2O6,是用于预防和治疗冠心病、心绞痛、各种类型高血压的药物之一,具有很广阔的市场前景。硝苯地平是二氢吡啶类钙离子拮抗剂，临床上广泛应用于高血压和心绞痛的治疗。其普通制剂反射性引起心率加快，激活交感神经系统，不利于对心肌缺血和心力衰竭的控制，而长效钙拮抗剂对缺血和衰竭的心肌没有上述的不良反应。但是,硝苯地平溶解度低,直接口服生物利用度差,具有显著的肝脏首过效应,消除半衰期短,常伴随不同程度的毒副作用,因此在临床应用上存在不足。
硝苯地平为第1代CCB,其作用机制为选择性抑制钙离子进入心肌和平滑肌细胞,从而引起包括冠状动脉在内的全身血管张力减小而扩张,达到降血压作用。此外,其还可减弱心肌收缩力,降低心机耗氧量,缓解心绞痛。硝苯地平用于治疗高血压时起效快,降压谷/峰比值高,经过20 多年的临床使用,其疗效得到了广大患者和医生的充分肯定。
- 要解决的问题
- 硝苯地平作为临床上用于治疗高血压、心绞痛的首选药，难溶于水，现有的普试剂存在起效慢、效果不理想等问题，而速效制剂虽然对药物的溶出有了改善，但成本相对较高。
- 本课题的目的是建立专属性强、灵敏度高的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS)的测定人血中硝苯地平的浓度，应用该方法至硝苯地平片人体药代动力学的研究。
- 可行性分析
液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术自Horning等于70年代进行开创性研究工作以来，经过20多年的发展已趋向成熟，应用日益广泛。它以LC为分离手段，MS为检测手段，集LC的高分分离能力与MS的高灵敏度、高专属性于一体，已成为药物杂质检查、体内药物代谢、代谢产物的药物代谢动力学研究和结构研究等现代药学前沿领域中最强有力的分析工具之一。应用LC-MS连用技术可获得复杂混合物中单一成分的质谱图，大大有利于药物杂质、药物代谢和内源性化合物的分离和鉴定，尤其适用于对血浆样品中的药物浓度进行定量和定性分析。相对LC-MS，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）也是痕量分析领域中的一种最有效的分析技术，它有二级以上的质量分析器串联组成，也是将分离和鉴定融为一体的分析方法，特别适合痕量组分的分离和结构鉴定。在这种多级质量分析模式下，LC-MS/MS的优势有：
- LC-MS/MS有更好的专属性，选择性和灵敏度。
- LC-MS/MS对样品的纯度要求低，可适当的简化样品前处理的程序，缩短分析时间。
- LC-MS/MS的定性功能更加完善，不经可以得到代谢物的质谱图，还可以得到其裂解产物的质谱图，而且通过操作模式的改变可以进行化合物的归属及结构研究。
因此，可以使用LC-MS/MS法较为精确的测定人体血浆中硝苯地平的浓度，并将该方法应用至硝苯地平片人体药代动力学的研究。
- 研究方法和内容
- 查阅文献，熟悉掌握硝苯地平的结构及其理化性质。
- 初步对硝苯地平的标准溶液进行LC-MS/MS检测
- 优化各项检测条件和参数
- 建立和优化LC-MS/MS定量分析人体血浆内硝苯地平的浓度
建立和优化方法时采用的实验步骤概括如下：
- Q1扫描确定母离子的质荷比 根据硝苯地平的性质，选择分析的极性（ 或-）、离子化方式（ESI或APCI）,根据分子量选择扫面范围和时间，确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。
- 子离子扫描确定子离子的质荷比 获得高质量的二级质谱图，以母离子的强度为MS图谱中峰强度的1/3到1/4为宜，平滑后选择子离子质荷比，准确到小数点后一位。
- 优化硝苯地平参数 根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对；选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间；用“Ramp”，优化Compound项下各参数，以及Source项下CAD参数。各离子对应分别设定；初步建立MRM方法；一般优化两次，已得到比较准确的结果。
- 优化离子源参数。
- 优化色谱条件 接色谱柱，用适当浓度样品考察分离情况，MRM方式可以不必所有峰都基线分离，但要注意避开介质离子抑制的干扰；调整色谱流动相组成和流速，并相应调整源参数。
- 工作计划
2月28日—3月20日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
