腺病毒通用型抗原的筛选及基因工程制备文献综述

 2022-12-23 16:42:58

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、实验背景

腺病毒(adenovirus ,Ad)属于腺病毒科,最早是于1953从一次手术中获得的人腺样体中得到[1],如今经过深入研究,已被应用于肿瘤基因治疗和病毒溶瘤等方面,但是针对人腺病毒导致的感染类疾病尚未研发出特效药物。腺病毒是一种无包膜的线性双链DNA病毒颗粒,其DNA约为38kb[2],具有二十面体形态,直径65~90nm,由蛋白衣壳、核心蛋白和DNA组成。至今已确定的100多个血清型,被进一步分为A-G七个亚属。[3-4]蛋白衣壳包括240个六邻体蛋白和12个五邻体蛋白,其中的六邻体蛋白就是型特异性蛋白。人腺病毒(HAdV)有52种,分为A-F六个亚属。

虽然人腺病毒感染有自限性,但对免疫力弱的人群如婴幼儿极易产生严重后果。人腺病毒主要通过空气飞沫传播、接触传播和粪口传播[5],因此对集体聚居生活的军队也极为危险。腺病毒可感染呼吸系统、胃肠系统、泌尿系统及眼部疾病 [6],可导致婴幼儿患上严重的肺炎或支气管炎甚至死亡,对北京地区呼吸新病毒感染儿童的研究[7]表明,致病腺病毒主要是3型和7型,其次是11型和14型。而首次于陕西发现的55型腺病毒是11型和14型的重组病毒,可导致患儿死亡。[8]而根据《腺病毒感染诊疗指南》显示,在军队中传播的人腺病毒也为7、14和55型人腺病毒。[9]由于腺病毒在世界范围内的广泛出现,致病谱广,涉及腺病毒3、7、11、55等多种型别[10-12],且有与其他病毒混合感染的趋势,[13]传统的抗原或抗体测定和基因测序法等方法都存在一些不足。目前常用的酶联免疫吸附法和PCR法[14-15]也要面临位置型别操作繁琐的问题,因而,制备含有3、7、11、14和55型腺病毒抗原的融合蛋白作为检测抗原成为了一种新的研究方向。

二、实验目的和意义

本研究筛选人腺病毒3型、7型、11型、14型、55型共用型抗原表位,将抗原表位串联成一个融合蛋白,利用基因工程技术制备融合蛋白,并分析其抗原性和免疫原性。以期得到融合蛋白作为检测抗原,继而为疫苗的研究提供帮助。

三、实验内容

1、筛选人腺病毒3、7、11、14、55型的强抗原表位并串联成融合蛋白

1.1用抗原分析软件分析3、7、11、14、55型人腺病毒的六邻体蛋白,筛选出以上每个型别的人腺病毒的强抗原表位的氨基酸片段。

1.2在片段间用2个甘氨酸和1个丝氨酸将片段连接成一个融合蛋白

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