一.选题的目的和意义
目的：建立稳定表达的TRPV3-HEK293细胞系。
意义：TRPV3广泛表达于皮肤和角质中，与多种生理功能息息相关：TRPV3激活后将增加许多促炎因子的释放，在皮肤炎症、脱发、疼痛、瘙痒中都有重要作用；TRPV3还与许多疾病的发生发展有关：如TRPV3的错义突变被证实与人类遗传性疾病奥姆斯特德综合征有关；TRPV3在骨关节炎、肝部恶性疾病、膀胱癌、直肠癌的发生发展中起重要作用。因此，TRPV3在皮肤炎症、瘙痒、癌症方面表现出的重要作用，使建立其稳定表达细胞系将有多方面的意义。
二.国内外对TRP通道的研究现状和文献综述
TRP通道（Transient Receptor Potential Channels，TRPchannels）在皮肤的多种细胞中有广泛表达，并且在皮肤调节功能中占有重要地位。它是存在于细胞膜上具有Ca2 通透性，不依赖电压的非选择性阳离子通道。近年来在哺乳动物中已经发现的与温度有关的包括 TRPA（TRPA1）、TRPC（TRPC5）、TRPM（TRPM2-5、8）、TRPV（TRPV1-4）四个亚家族，共 11 个离子通道[1]。TRPV亚家族中包括TRPV1、TRPV2、TRPV3和TRPV4。其中TRPV3于2002 年首次检测到角化细胞中有表达。经研究表明，人类TRPV3（hTRPV3）在皮肤、舌头、背根神经节、三叉神经节、脊髓和大脑中表达， hTRPV3在生理温度范围内具有热敏性[2]。人胚胎肾细胞293（HEK293），是一个衍生自人胚胎肾细胞的细胞系，常用于表达研究外源基因，具有较高的转染效率，且易于培养。
1.TRP通道简介
TRP通道最早被发现于果蝇的视觉系统，1975年Minke等在筛选突变体时发现了一株奇特的表现型，这株突变体对持续的光刺激只产生瞬时的而非持续的锋电位，TRP通道因此得名[3]。根据同源性的不同，TRP离子通道超家族可分为七个亚族，即TRPC家族、TRPV家族、TRPM家族、TRPP家族、TRPN家族和TRPML家族[4], 这是一类在外周神经系统和中枢神经系统，以及非神经组织中分布广泛的、和多种感觉有密切联系的阳离子通道蛋白。皮肤神经末梢的 TPR 通道，除表达感觉功能外在表皮角质形成细胞和黑素细胞等非神经元细胞中也发挥重要作用[5]。
2.TRPV通道简介
TRPV亚家族是哺乳动物的一类于温度感受有十分密切关系的离子通道，并且主要是与哺乳类动物的温觉感受相关（TRPV1-4），分别是适中、极端伤害性热刺激和非痛温觉感受 [6]，而冷觉的感受则与之无关。TRPV5和TRPV6则是对温度不敏感，为Ca2 选择性通道。
TRPV1能被辣椒素激活，又被称为辣椒素受体，它还能被伤害范围内的温度升高所激活（gt;43℃），这表明它在体内作为疼痛热刺激的传感器[7]。TRPV2则对辣椒素不敏感，而是在温度达到52℃时被激活，即对伤害性热刺激敏感[8]。TRPV1和TRPV2被认为在伤害性热刺激中起到了核心作用。TRPV3和TRPV4是对温和性热刺激敏感的离子通道，前者被33℃的温热刺激激活，引起Ca2 内流，一定范围内（33-39℃）表现出增强的响应[9]；后者最初作为渗透压感受器，可以被低渗透压激活，后来证实可以感受27℃以上的温和刺激[10]。
