碳点-阿霉素-基因共递送系统细胞学评价文献综述

一、拟研究或解决的问题

1. 构建阿霉素-基因的共递送纳米复合物
2. 评价阿霉素-基因共递送纳米复合物对肿瘤细胞的细胞毒性
3. 定量测定胞内DOX浓度
4. 研究纳米复合物在细胞内的分布情况和对细胞周期的影响
5. 检测复合物对肿瘤细胞内miR-21基因表达的抑制作用
6. 采用的研究手段

课题构建了阿霉素-基因的共递送纳米复合物，采用MTT法评价其对肿瘤细胞的细胞毒性；并定量测定胞内DOX浓度；采用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪研究纳米复合物在细胞内的分布情况和对细胞周期的影响；采用RT-PCR检测复合物对肿瘤细胞内miR-21基因表达的抑制作用。

1. 以荧光碳点（CD）为载体，阿霉素（DOX）为抗肿瘤药物，构建碳点负载阿霉素（CD-DOX）载药体系

方法：

分别配制质量浓度１ｍｇ／ｍＬ 的碳点和阿霉素水溶液，取5ｍＬ 阿霉素溶液分别与 碳点溶液混合，用PBS缓冲液调节溶液的PH值为7.4。分别进行载体与药物质量比为0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.2和1.5的载药实验。37 ℃避光条件下，分别将混合液磁力搅拌过夜后放入透析袋中。相同条件下，在50ｍＬ 水溶液中透析24ｈ。随后，分别取透析袋外溶液测量吸光度，透析袋内溶液即为所得的CD-DOX载药体系。

2.应用二甲基噻唑蓝法（MTT法）评价对肿瘤细胞的毒性

方法：

选用 HepG２细胞和LO２细胞作为实验对象。细胞毒性采用MTT法进行检测。分别将两种细胞接种在96孔板中，密度为2times;10⁴个细胞／孔。放置培养箱中培养24ｈ后，取出孔板换液，随后每孔加150mu;Ｌ含不同质量浓度CD、DOX和CD-DOX载药体系的培养液。其中,未处理的细胞作为参照组。放入培养箱中分别培养24ｈ和48ｈ后，每孔加10mu;ＬMTT溶液 （质量浓度为５ｍｇ／ｍＬ），置于培养箱中继续培养４ｈ后，取出孔板，吸走上清液，每孔加100mu;ＬDMSO溶液。最后，用酶标仪测试各孔在波长450nm处的吸光度，计算出细胞活性率。

3.采用激光共聚焦显微镜研究分布情况

方法：

（1）提前将PBS放在37度水浴锅中。