- 目的及意义：
目的：建立原料药a的细菌内毒素检查方法。
意义：内毒素进入机体血液循环系统会引起发热等一系列不良反应，因此，药物细菌内毒素检查是保证药物安全性的重要质量指标。为更好的控制产品质量，保证用药安全，有必要对原料药进行细菌内毒素检测。
- 内容：
注射给药过程中 ,偶尔会出现发热、寒战、头痛、恶心、呕吐等症状 ,严重的甚至昏迷、死亡 ,将这种药物的不良反应称之为热原反应 ,能引起上述热原反应的物质被称之为热原( py rog en)。 虽然直到今天人们仍然对其本质存在争论 ,但普遍认为革兰阴性细菌产生的内毒素是其主要来源 ,虽然不是所有已知的热原都具有内毒素 (脂多糖 )的结构 ,但所有已知的内毒素都具有热原活性 ,在 GM P条件下生产的药品的质量控制 ,一般认为不存在内毒素就意味着不存在热原。 这也正是鲎血变形细胞溶解物试验 ( 1imulLls amo ebo cyte|y sa tetest, T AL)用于药物生产过程或药物成品热原检测的基础。细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分 ,于细菌死亡解体后释放。其在体内作用于单核巨噬细胞产生多种炎症细胞因子 ,如: 肿瘤坏死因子、白细胞介素 ( IL)一 1 IL一 6、 IL一 8、前列腺素、凝血素、干扰素、血小板激活因子等。 这些因子适量时可激活免疫系统 ,对机体产生有益作用。过量时可引起机体严重的病理生理反应 ,表现为发热、低血压、心动过速、休克、多器官功能衰竭 ( MOF)及死亡 [1- 2]。 其对组织细胞的损害远远超过内毒素本身对机体的直接影响。 据有关资料 ,正常人血中内毒素浓度 0. 1 EU /ml,超过此值即可诊断为内毒素血症。 内毒素血症与肠源性感染关系密切 ,在严重创伤、烧伤、大手术后、全胃肠外营养及肿瘤放疗、化疗后等情况下 ,内毒素从肠道移位进入血液 ,造成内毒素性疾病 [3]。使用抗生素也会引起内毒素体内释放 ,如近年来开发的第三代头孢类抗生素 ,在杀死细菌的同时释放大量内毒素 ,造成严重的内毒素血症。因此 ,检测细菌内毒素在药品质量控制和临床治疗监测中具有重要意义。
细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以判断
供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的 一种方法，中国药典首次收载于 1990 年版 1993 年增补本［4］，经过不断完善，收载品种不断增加，现已成为药品检验中控制注射剂细菌内毒素污染的经典方法。细菌内毒素检查法在中国药典1990 年版 1993 年增补本中仅包含凝胶法灵敏度复核和凝胶限度实验;在1995年版增加了凝胶法供试品干扰试验; 2000 年版完善了凝胶法供试品干扰试验，在附录 XIXF 细菌内毒素检查法应用指导原则中收载了细菌内毒素限值的确定、标准物质、鲎试剂、细菌内毒素检查用水的描述、并且首次收载了细菌内毒素定量测定法(光度测定法) ［4 － 6］。2000年美国、欧洲、日本三方达成统一的细菌内毒素检查法协调案后，各国药典均有较大修订［7］，细菌内毒素检查法在世界范围内首次以统一的书写格式和内容分别收载于 USP 24－ NF 19、EP 4、JP 2001［8 － 10］。中国药典紧跟国际
形势，2005 年版参照美欧日药典对其进行了较大修订，收载了凝胶半定量检查法和光度测定法，并且在叙述上采用国外药典的叙述方法，使其与国际 一 致［11］。中 国 药 典 2010 年 版 基 本 延 续 了2005 年版内容，仅增加对细菌内毒素检查用水的要求、按人体表面积计算限值的方法和细菌内毒素单位( EU) 与细菌内毒素国际单位( IU) 的换算关系，修订了关于干热灭活细菌内毒素的时间要求［12］。2000 ～ 2010 年，世界各国药典均有修订，2010 年美国、欧洲、日本再次进行细菌内毒素检查法的国际协调工作，形成新的统一的细菌内毒
素检查法［13 － 16］。
通过查阅资料了解产品的溶解性及制剂配方，选择适量的能够与水互溶的有机溶剂溶解，然后再用BET水稀释。如果样品不会再次析出就直接进行后续的细菌内毒素凝胶法实验。如果样品加水后析出，则在有机溶剂中添加部分比例的增溶剂来阻止样品再次析出，然后再进行后续的细菌内毒素凝胶法实验。
同时，设计回收率试验证明供试品有机溶剂溶解的方法不会对供试品中的内毒素检出产生影响，还需证明特殊溶剂本身不会对凝胶试验产生干扰。
需要根据样品的性质找出合适的有机溶剂，以及合适的助溶剂，助溶剂和有机溶剂的核实比例。由于采用特殊方法处理供试品，必须设计合理的试验来证明：
