开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题的研究背景、意义和目的
KRAS基因是ras基因家族中三种癌基因的一种，为表皮生长因子受体（EGFR）信号传导通路的下游基因。正常的KRAS基因可抑制肿瘤细胞生长，而一旦发生突变，它就会持续刺激细胞生长、发育、增殖，引起细胞恶变，导致肿瘤发生。因此KRAS基因突变与人类恶性肿瘤的发生发展及肿瘤的复发密切相关。突变的KRAS蛋白难以采用传统抑制活性位点的方式设计特异性抑制剂，被称为“不可靶向的药物靶点”。迄今为止，针对靶向KRAS驱动的肿瘤的治疗性或预防性研究仍未取得明显进展，而肿瘤疫苗具有激活适应性免疫反应来消除携带突变型KRAS细胞的潜力，是当前研究热点之一。然而，肿瘤细胞源于自体组织，虽然存在肿瘤特异性突变基因的表达，但由于肿瘤组织形成了一套完善的免疫耐受机制，因此很少被识别为非自体并被免疫系统消灭。所以，在肿瘤疫苗的开发过程中如何打破免疫耐受是一个必须解决的问题。免疫原性氨基酸是一类含有高免疫原性化学基团的非天然氨基酸。天然蛋白质中插入此类非天然氨基酸可以使一些自体蛋白突破自身免疫耐受转化为自身抗原。将对硝基苯丙氨酸定点引入目的蛋白，提供了一个简单而且有效的打破免疫耐受的方法。
本实验室前期已构建含对硝基苯丙氨酸的KRAS疫苗分子，本课题将构建好的KRAS-NitraTh进行表达和分离纯化，最终获得纯度大于90%的蛋白，并运用Western Blot及MALDI TOF对蛋白进行鉴定，最后，通过动物实验分析该疫苗分子的免疫原性，为进一步后期研究提供理论基础和实验依据。
二、课题研究的主要内容
1、含对硝基苯丙氨酸的KRAS疫苗分子的表达纯化
1.1 运用M9培养基对突变蛋白进行表达。
1.2 通过包涵体变性、复性及亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化。
2、含对硝基苯丙氨酸的KRAS疫苗分子的免疫原性分析
2.1 分析含对硝基苯丙氨酸的KRAS疫苗分子对Th1/Th2细胞分化的影响。
