开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、研究背景和目的:
Connectivity map ( 简称 CMAP) 为一个基因表达谱数据库,利用小分子药物处理人类细胞后的基因表达差异,建立的小分子药物、基因表现与疾病相互关联的生物应用数据库。[1]
天然产物作为传统中药的物质基础,其作用靶点的研究和作用机制的阐明一直是药学研究者关注的问题。据研究报道,麦角甾醇具有较好的降脂效果,但对其药理机制和作用研究还不够深入,其作用靶点尚不明确。本研究拟利用CMAP数据库,将麦角甾醇转录组数据输入进去,推测甾醇改善肝脏脂质蓄积的靶标。
- 研究意义:
中药具有多组分多靶点的作用机制[2],从目前对与中药作用机制的研究来看,中药药效的发挥应该是多种有效成分的组合对基因、蛋白和小分子代谢物等机体生物分子网络进行广泛调节的综合结果。因此从微观上明确中药药效成分对靶点的精确作用,才能够科学的解释中药的作用机制。近年来,甾醇的降脂作用成为了研究热点之一。甾醇可通过降低胆固醇、甘油三酯和脂肪酸等来调节血脂,但是其作用机制处于研究的起步阶段,明确甾醇的作用靶点是研究甾醇降脂作用的关键步骤,是研发新的降血脂药物的希望。
三、研究内容和方法:
1. 基于细胞模型的麦角甾醇药效评价
基于人的肝癌细胞(HepG2)诱导的脂质蓄积模型,评价麦角甾醇降脂活性,实验方法如下:
HepG2细胞高糖培养基DMEM(含10% FBS,含双抗),置于37 °C,5% CO2培养箱中培养。当肉眼观察到细胞长到70-80%的时候,将培养基换成新鲜的10% FBS的DMEM,空白组、模型组和给药组分别加入等量培养基、1 M油酸和棕榈酸、1 M油酸和棕榈酸 麦角甾醇孵育24 h,收集样品,然后用以下2种方法评价甾醇的活性:
(1)对细胞进行油红染色,显微镜下观察油红染色的密度;
