课题名称 不同浓度甲氨蝶呤对CHO细胞表达量影响探究课题性质 基础研究 radic; 应用课题 设计型 调研综述 理论研究1.课题背景CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞，该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛使用的细胞。
全世界批准正式应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中只有一种(乙肝疫苗)是由酵母菌生产的，其余所有产品都是由CHO细胞和大肠杆菌生产的，大肠杆菌不能形成有活性的二聚体(如白介素 2)，也不具有糖基化的功能(如 EPO)，而 CHO 却具有以下优点：(1)具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子；(2)既可贴壁生长，又可以悬浮培养，且有较高的耐受剪切力和渗透压能力；(3)具有重组基因的高效扩增和表达能力，外源蛋白的整合稳定；(4)具有产物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的内源蛋白，便于下游产物分离纯化；(5)能以悬浮培养方式或在无血清培养基中达到高密度培养。
且培养体积能达到 1000L 以上，可以大规模生产。
因此 CHO 成为表达复杂生物大分子的理想宿主。
另外 CH0 细胞在基因工程使用中还有一个优点，该细胞属于成纤维细胞(fibroblast)，是一种非分泌型细胞，它本身很少分泌 CHO 内源蛋白，因此对目标蛋白分离纯化工作十分有利。
2.课题目的在过去的几十年里，人类对动物细胞的培养技术进行了大量的研究开发，取得了很大进展，但是利用 CHO 细胞表达外源基因的技术水平尚不能满足生物药品的开发和生产的要求，目前上游工作中主要存的问题之一是：构建的重组 CHO 细胞生产效率低，产物浓度亦低。
本课题主要研究在CHO细胞表达系统中不同浓度的甲氨喋呤对CHO细胞表达的影响。
通过提高甲氨喋呤的浓度得到高拷贝的CHO细胞，以期提高CHO细胞的表达水平。
3.课题原理基因扩增当将哺乳动物细胞置于需要增加正常组成型基因产物的环境中时，由于该基因的拷贝数增加，在许多情况下存活的细胞会这样做。
这个过程被称为基因扩增，涉及染色体的大片区域，这样不仅所选基因被扩增，而且周围区域也被扩增。
