间充质干细胞分离及其体内示踪文献综述

 2022-12-30 15:40:51

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、研究背景

近些年,细胞治疗得到快速发展[1],并在癌症[2]、关节炎[3-5]、中枢神经系统病变[6-8]等领域均显示了不俗的疗效,尤其是随着CAR-T细胞被美国FDA批准上市,细胞药物、细胞治疗已成为下一个风口。间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)是一种成纤维细胞样多能细胞,具有易于分离和培养、多分化潜能、旁分泌效应和免疫调节功能等优点,在再生医学领域引起了越来越多的关注,被认为是最有希望用于治疗多种疾病的细胞药物。

1.MSCs简介

MSCs起源于中胚层,在人和动物的骨髓、脐带血、外周血、脂肪及肝脏等器官组织中均有分布。研究表明,间充质干细胞不仅具有多向分化的潜能和强大的自我复制能力,而且移植后基本无排斥反应或极弱,显示了良好的可移植性。同时MSCs具有免疫抑制作用,与其他细胞共移植后可有效降低受体的免疫排斥反应,从而显著提高移植物的存活周期。目前在临床上MSCs对于心脏疾病[9-11],关节炎[12],移植物抗宿主病(GvHD)[13, 14],肝纤维化[15-17]等疾病中取得一定治疗效果。

2.IVIS简介

小动物活体成像技术(IVIS)具有操作简单、结果直观、非侵入性、高度灵敏等特点,可直观、实时地监测活体生物体内的细胞活动。IVIS主要采用生物发光成像(Bioluminescence imaging,BLI)与荧光成像(Fluorescence imaging)。BLI利用荧光素酶(luciferase,Luc)报告基因标记细胞,在适宜的条件下被荧光素酶标记的细胞能稳定地表达荧光素酶, 再通过腹腔或静脉注射相应的底物荧光素 ( luciferin) , 荧光素酶与相应底物荧光素发生氧化反应并产生光信号从而发光而被检,可以实现对体内细胞生物学过程的实时动态监测。

3.QPCR简介

QPCR(Real-time Quantitative PCR Detecting System),即实时荧光定量核酸扩增检测系统,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便,结果精确等优点。

对于药物而言,研究其体内处置过程有利于评价药物的安全性,指导临床合理用药。目前小分子、大分子药物已建立起相对成熟的体内药动学研究方法,而细胞具备增殖、迁移和靶向能力,在机体内部的运动不仅和体液循环和细胞表面特征有关,同时又受到生物靶向影响,人们对于细胞药物在体内命运缺乏认识。鉴于此,有必要用传统的药代动力学理论,结合细胞药物的自身特点,系统研究细胞药物在体内的处置过程。我们希望以MSC为研究对象,利用多种检测手段,考察MSC在人体内随时间变化的动态过程,以及其在不同组织,特别是靶器官中的分布。

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