开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 选题依据及意义
依据：目前大量的研究结果表明, 决定重组蛋白在哺乳动物细胞中表达水平的因素是多方面的, 包括目的基因在基因组上的拷贝数, 目的基因在基因组的整合位点, 以及指导目的基因表达的启动子强度, 表达产物的稳定性等。很多商业化真核表达系统都针对这些因素进行了优化设计, 如选用带有加压扩增系统( DHFR等)。
意义：DHFR缺陷型的细胞，不含二氢叶酸还原酶基因，不能合成核酸，必须在含有HT的培养基里生长。当转染的目的基因连有DHFR基因时，阳性细胞也就获得了DHFR基因。MTX是二氢叶酸还原酶的抑制剂，可阻碍其作用。当细胞培养基内含有MTX时，二氢叶酸还原酶被抑制，通过反馈调节。使得该基因自我扩增，连带其上下又100-1000kb的基因都会扩增。如此目的基因也得到扩增，即可提高目的蛋白的表达量。
- 拟研究或结果的问题
构建含有DHFR基因的PUC57质粒，进行酶切获得目的基因，选择合适的真核表达系统进行连接。
- 采用的研究手段
- 酶切拼接
载体的基本骨架包括启动子、polyA信号等，EcorI切开，Klenow酶补平，待用。目的基因（GLP-1）、IRES及筛选基因（DHFR）和信号肽序列拼接起来。Nru I/Stu I双酶切切出目的基因，插入到PEF6载体中。
- Gibson拼接
- 参考文献
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