开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
课题背景：
血糖的稳定性主要依赖于胰岛beta;分泌的胰岛素和alpha;细胞分泌的胰高血糖素的平衡，胰岛细胞的相对不足和功能的紊乱是糖尿病发病的主要原因。Ⅰ型糖尿病是由于胰岛beta;细胞的自身免疫破坏，Ⅱ型糖尿病则是以胰岛素分泌受损伴随着胰岛素抵抗为特点，其他类型的糖尿病也与胰岛beta;数量或/和质量的改变有关。随着糖尿病的研究进展到分子基因水平，我们发现pax4基因对胰岛beta;细胞的生存和增殖有至关重要的作用。
pax4基因属于编码促进胚胎细胞增殖、分化及存活的转录因子pax基因家族。Pax(pairedbox)因子是类非常保守的转录因子，参与细胞内信号传导的高级调控，在胚胎发育过程中对细胞分化、更新、凋亡等都起十分重要的调控作用。
Greenwood等的谱系示踪技术证实，含有pax4重组基因启动子的小鼠可以产生更多的胰岛内分泌细胞。Wang等的基因打靶技术也提示，pax4的缺乏可以导致胰岛beta;细胞和delta;细胞的成熟障碍和胰岛alpha;细胞的大量增加。
在此基础上我们希望pax4的启动子和质粒pGL3连接，构建人pax4启动子载体，利用载体的荧光素酶报告基因，寻找能够调控pax4的表达的物质，得到治疗和预防糖尿病的新方向。
实验流程：
1.人pax4启动子基因扩建。
以pax4转录起始位点，在其上游2000kbp，下游200kbp寻在启动子，此为模板。上游引物：5CGGGGTACCGGGGCATAATGATTTAGGTTTGGAG3
下游引物：5CCGCTCGAGTGATCCCTGGGCGTGAGACAGAGGT3。上下游引物5端分别携带KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点。PCR反应条件：95℃5min；95℃30s，52℃30s，72℃2min30s，30，72℃10min，进行PCR扩增，电泳验证，普通琼脂糖凝胶DNA回收。
