抗菌药物靶向修饰后的应用研究文献综述

1.研究解决问题

本课题组已成功利用牛血清白蛋白（BSA）为表面稳定剂得到高效率黄色荧光ZnO量子点（ZnO QDs）。提高荧光量子点的载药量，得到载药金纳米簇（LOF@ZnO）。进一步，活化LOF@ZnO表面BSA上的多个活性基团羧基，与细菌靶向肽（TGRAKRRMQYNRR）进行共价结合。得到纯化后的产物LOF@ZnO-PEP。选择实验室自制近红外有机荧光探针MPA，利用DCC及NHS对其活性基团羧基进行活化，活化后产物与BSA上的多个氨基官能团进行进一步反应，产物同样利用G25凝胶柱进行分离纯化，得到最终产物LOF@ZnO-PEP-MPA。同时拟选择金黄色葡萄球菌（SA），大肠杆菌（EA），枯草芽孢杆菌（BS）作为纳米复合物对细菌亲和性考察的对象。通过定时、定量的孵育过程及可见波段黄色荧光的检测，比较LOF@ZnO-MPA与LOF@ZnO-PEP-MPA在不同细菌中的分布情况，以此对比多肽修饰前后的纳米复合物对细菌靶向能力，采用block实验验证多肽修饰的纳米复合物细菌特异性。

2.采用的工具和方法

2.1。材料ubi29-41（分子量：1.69 kDa）是从中国获得的肽科技有限公司（上海，中国），氧化锌（纯度：99.8%）和牛血清白蛋白购自sigmaealdrich（上海，中国）和甲氧西林是lullabypharm化学获得有限公司（武汉，中国）。MPa（分子量：995）在我们的实验室制备。1-乙基—3 - [再]碳二亚胺（EDC），N，N0二环己基碳二亚胺（DCC），N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），3（4，5 - dimethylthialzol-2-yl）—2，5-diphe-nyltetrazolium溴化物（MTT），RPMI 1640培养基，胎牛血清（FBS），青霉素，链霉素，和胰蛋白酶EDTA从商业来源购买。超微孔水（18.2亩）使用。所有其他溶剂和试剂在本研究中所用的标准分析试剂级。

2.2。“牛血清白蛋白合成ZnO@BSA, ZnO@BSA-PEP 和ZnO@BSA-PEP-MPA 2. 2. 1。BSA包覆的ZnO量子点的合成（ZnO @ BSA）根据合成路线报道的帕特雷合成ZnO量子点等人。[ 31 ]。醋酸锌（0.55克）分散到甲醇（25毫升）和KOH（2.8克）加入甲醇（50毫升）制备乙酸锌溶液（0.1 M）和KOH溶液（1 M）分别。KOH溶液滴加到锌恒定的室温搅拌的醋酸溶液。的最终pH溶液调节至10。后的反应是在室温下保存1小时在不断搅拌下，发现溶液呈现出明亮的黄绿色荧光激发波长为365 nm，表明ZnO量子点的形成。的然后将溶液在12000转/分钟离心10分钟，上清液被丢弃。将所得到的沉淀物在真空烘箱中干燥得氧化锌量子点粉末。最后，超纯水（12毫升）被用来使沉淀量子点的质量浓度。随后，准备改善ZnO量子点的稳定性是BSA涂层。蛋白质粉（0.10克）溶解在ZnO量子点的水溶液（2毫升）和溶液中在室温下搅拌12小时得到的溶液似乎比初始溶液更透明。离心（10000转，10分钟）然后使用以除去未BAS系统和收集沉淀再溶解在超纯水（2毫升）获得的ZnO @ BSA水溶液解决方案。

2.2.2。ZnO和ZnO”合成“bsa-pep bsa-pep-mpaZnO @ BSA水溶液在EDC和NHS活化（摩尔比ZnO @ BSA：NHS：EDC是1：1.5：1.5）在室温下4小时。加入ubi29-41在活性氧化锌”BSA溶液和新系统的搅拌室温度12小时。缀合物被命名为ZnO @ bsa-pep纯化在Sephadex G-25柱平衡的Tris缓冲液过滤（10毫米，pH值8）除去未结合的氧化锌”BSA和ubi29-41片段。此外，MPA用EDC和NHS反应（摩尔比为：EDC NHSfrac14;1：1.5：1.5）在房间4小时以上激活MPa反应在黑暗中与温度ZnO @ bsa-pep（MPA：摩尔比为1∶1的ZnO @ bsa-pep）在黑暗中12小时。产品经Sephadex G-25柱平衡的纯化用Tris缓冲液（10 mM，pH 8）。纯化后的产品储存在4℃。含有未反应的PEP或MPA上清液稀释到一定量的测定高效液相色谱法。对照组不用EDC HCl为一美元参考，而ZnO @ BSA物理混合物，PEP和MPA。的内容PEP结合在ZnO @ BSA约59.4毫克锌1毫克“bsa-pep。的内容MPA共轭对ZnO @ bsa-pep-mpa约38.7毫克1毫克bsa-pep-mpa ZnO@BSA-PEP-MPA.

2.2.3。范@ ZnO PEP MPa的合成和遇到“ZnO PEP MPa范@ ZnO PEP MPA是通过以下简单的方法制备。牛血清白蛋白（0.10克）和范（0.06克）或Met（0.02克）混合，然后溶解在氧化锌量子点的水溶液（2毫升）。在室温下搅拌适度后12小时，离心（10000转，10分钟）是用来除去未浅和范或遇到。ubi29-41和MPA的进一步结合进行在第2.2.2节提到的方法。载药率（DL，%）使用以下公式计算：DL（%）frac14;（wdrug／W）100%，wherewdrug andware范重量或满足涂ZnO @ BSA的测定高效液相色谱法和载药纳米ZnO @ BSA，分别。DL的货车/范@ZnO and Met/Met@ZnO were 8.49 plusmn; 0.08% and 9.46 plusmn; 0.9%,，分别。

2.3。表征由传输的ZnO @ bsa-pep-mpa形貌电子显微镜（TEM，飞利浦FEI TECNAI G2二十几岁的双胞胎，一个荷兰）加速电压为200 kV。ZnO @ bsa-pep-mpa粒度分布由Mastersizer 2000（Malvern激光粒度分析仪测定，在英国）25、ZnO @ bsa-pep-mpa贮存稳定性（1毫克1）悬浮在PBS还通过粒度分析仪监测。测定了ZnO和ZnO @ @ BSA bsa-pep-mpa吸收光谱通过紫外六754-pc2.4。细菌的亲和性研究ZnO @ bsa-pep摄取，BSA和ZnO ZnO @ @ bsa-pep（阻塞）是金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌ATCC 6538，调查），枯草芽孢杆菌（B.枯草芽孢杆菌，ATCC 23059）和大肠杆菌（大肠杆菌，ATCC 33456）。所有的细菌培养过夜在luriaebertani（LB）中在37℃下在5% CO2摇床。细菌（150毫升的培养过夜）重新悬浮在50毫升新鲜的LB培养基中培养摇床。细菌（10毫升）在稳态生长的ZnO @ BSA孵育（200毫升）或ZnO @ bsa-pep（200毫升）的LB培养基中，37℃2小时阻断实验，ubi29-41（1毫克/毫升，50毫升）加入到菜1小时前添加ZnO @ bsa-pep。的细菌在10000转离心10分钟，离心管（15ml）。的回收的细菌颗粒，PBS洗三次，用10毫升的LB培养基。不同处理的细菌的荧光图像样品用激光共聚焦荧光显微镜拍摄（LCFM，fv1000，奥林巴斯，日本）。收集整理了ZnO量子点的黄色荧光，和（405 nm）的激发光和发射滤波器（570plusmn;15 nm）用于荧光检测。此外，细菌的结合和渗透的效率ZnO@BSA or ZnO@BSA-PEP进细菌（金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）等通过TEM检查。一滴涂法制备透射电镜样品处理细菌细胞在铜网45，液滴的过量了用滤纸除去。此外，细菌的亲和性研究进行了评价用流式细胞仪（流式细胞仪，生物科学，美国）的比较黄色的荧光强度与BSA或氧化锌ZnO@BSA or ZnO@BSA-PEP处理细菌

文献综述摘要 死亡率增加的致病性细菌感染引起的称为早期感染诊断和有效的抗生素替代品。在这项工作中，我们开发了一种荧光纳米探针named ZnO@PEP-MPA by conjugating BSA-stabilized ZnO quantum dot (ZnO@BSA) with UBI29-41, an

命名为ZnO”pep-mpa共轭结合BSA稳定的ZnO量子点（ZnO @ BSA）与ubi29-41，一anti-bacteria peptide fragment, and MPA, a near infrared (NIR) dye. The nanoprobe ZnO@PEP-MPA