开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
1. 选题的目的及研究意义
谷胱甘肽( Glutathione , GSH ) 是细胞内重要生物活性物质,在蛋白质和 DNA 的合成、 氨基酸的转运、 细胞的保护等重要的生物学现象中起着直接或间接作用。 它主要分布于动物、 植物、 微生物细胞中 ,被广泛应用于临床医学、 运动保健、 食品加工等很多领域。人类由于饮食内容、年龄、应激状态等影响,体内 GSH 水平降低,这就是引起人类早衰和生病的主要原因,因此人类必须从外部摄取较多的 GSH,随着人们对 GSH 研究及认识的不断深入,GSH 的市场需求正迅速扩大。
GSH的合成实际上是将三种氨基酸(半胱氨酸,谷氨酸,甘氨酸)通过一定的酶系连接起来,因此,添加前体氨基酸对于GSH的合成将会起到促进作用。其中半胱氨酸在GSH合成中起到关键作用。若能提高半胱氨酸载体蛋白的活性或开放通道,则能提高半胱氨酸的利用率,进而提高GSH产量。大肠杆菌K12中存在一种胱氨酸转运系统(CysXYZ),分别由三种蛋白(膜蛋白、底物结合蛋白、ATP结合蛋白)构成。
本文便基于这一机理,过表达半胱氨酸底物结合蛋白,使进入大肠杆菌体内的半胱氨酸增多,从而使在体内合成的谷胱甘肽大量增加,提高大肠杆菌产谷胱甘肽的能力。
2. 拟研究或解决的问题
2.1 GSH的检测方法和提取条件的建立
2.2 产GSH大肠杆菌株生长曲线的绘制
2.3 重组质粒的构建
2.4 质粒稳定性的研究
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