课题名称 套索肽Capistruin的异源表达和分离纯化课题性质 ■基础研究应用课题设计型 调研综述 理论研究1．课题解决的问题套索肽Capistruin是一种来源于革兰氏阴性菌Burkholderia thailandensis E264（ATCC number: 700388）的套索肽，可通过抑制RNA聚合酶活性发挥抗菌活性，尤其对绿脓假单胞菌的RNAP具有较强特异性。
但B.thailandensis菌发酵产生Capistruin的量极低。
为此，本课题通过克隆套索肽Capistruin合成基因簇capABCD并在E.coli中异源表达，力争提高套索肽Capistruin的产量，从而分离纯化到相对较纯的Capistruin，为将来进行突变体研究和合成机理探索奠定基础，也为其现实应用开辟新的途径。
2．研究方法和技术路线2.1. 研究方法本研究主要优化了Burkholderia thailandensis E264的培养及发酵条件，构建pETDuet-capABCD原核表达载体，在E.coli中异源表达，通过发酵培养，对其发酵上清液固相萃取浓缩，通过HPLC检测和LC-MS分析，计算其产量，并最终获得Capistruin纯品。
2.2 技术路线本研究基本技术路线如图1： 图1 研究技术路线3．论文课题研究进度安排2014.3.04----3.10 确定选题，查阅文献，购买实验耗材。
2014.3.11----3.20 原核表达载体pETDuet_capABCD的构建。
2014.3.21----4.01 载体pETDuet_capABCD在E.coli中的诱导表达。
2014.4.02----5.15 利用HPLC和LC-MS检测，进行capistruin的分离纯化。
2014.5.16 完善数据，撰写论文。
4．文献综述4.1 套索肽的基本类型套索肽（lasso peptides）是一类具有抗菌活性的小分子多肽。
