开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
1. 选题的目的及研究意义
酪氨酸作为人体内的一种必需氨基酸,广泛应用于医药、食品和饲料等行业。工业上一般采用微生物发酵法生产酪氨酸,其生产菌株的筛选主要是通过诱变或者基因工程的手段,去除酪氨酸合成代谢中的各种反馈调控作用。然而由于微生物合成酪氨酸的代谢调控机制非常复杂,通过现有手段很难完全去除,此时其残余的调控作用往往会阻碍酪氨酸的进一步合成。此类现象在其他氨基酸的菌种选育中也广泛存在。
针对以上的现象,我们设计有效的基因敲除方法对生产酪氨酸的菌株进行代谢工程改造。通过敲除分支途径,达到目的产物的高产目的。
2. 拟研究或解决的问题
2.1 基因有痕敲除理论及方法的建立
2.2 基因敲除组件的构建
2.3 抗性基因替换的验证
2.4 敲除引物设计及验证
2.5 PCR条件的确立
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