南极放线菌N-1α-葡萄糖苷酶抑制剂的分离纯化文献综述

 2023-01-14 08:01

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

课题背景:放线菌是原核生物的一个类群,可合成多种多样的次级代谢产物,如抗生素、酶抑制剂、维生素等供人类所需。随着对放线菌筛选范围的扩大,人们发现在极端环境下微生物,如南极具有低温、高盐和强辐射的地理环境特征,可形成独特分子生物学机制,合成新颖、独特的活性物质。本实验室有一株从南极海泥中分离得到的放线菌N-1,其发酵液对多株多重耐药的葡萄球菌(MRSA)表现出很强的抗菌活性,尤其对alpha;-葡萄糖苷酶有抑制作用,这对研究开发新型alpha;-糖苷酶抑制剂具有很好的研究前景和空间。

拟研究和解决的问题:机体内的alpha;-葡萄糖苷酶分解食物中的多糖为单糖后经小肠吸收,其含量和活性的失衡可引发代谢紊乱疾病,如糖尿病等。长期以来,人们试图寻找化合物抑制或调节alpha;-糖苷酶活性。目前,其抑制剂的来源主要有从天然植物中提取、人工合成和微生物发酵产生,后者为主要的来源(如阿卡波糖等)。

本实验在放线菌发酵液中分离纯化得到的alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制多糖的分解,使糖的吸收相应减缓,从而减少餐后高血糖,配合饮食有望治疗糖尿病。

研究目的和意义:本毕业论文旨在从微生物发酵液中N1活性物质进行分离纯化,设计并筛选出各种中等极性、弱极性的大孔吸附树脂,再利用极性差异,分离得到目的产物。在实验室水平探索南极放线菌N-1alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂的稳定的分离纯化工艺,为后续研究和中试放大提供实验基础。

研究内容:在实验室水平探索南极放线菌N-1alpha;-葡萄糖苷酶抑制剂的稳定的分离纯化工艺,设计并筛选出各种中等极性、弱极性的大孔吸附树脂,再利用极性差异,分离得到目的产物。

具体技术路线及实验方案如下:

查找相关文献,设计筛选国产与进口大孔吸附树脂→树脂预处理→发酵液中用PNPG法检测活性物质→筛选树脂→树脂在不同条件(pH、震荡时间等)下静态吸附与洗脱并测定活性物质→小试打通实验路线→优化分离条件,中试放大(动态吸附与洗脱)→测定活性→获得N-1活性目的产物。

实验设计思路为:

① 分别用备选的各种树脂吸附发酵液中的N-1活性物质,考察各种树脂对N-1活性物质吸附能力,选出吸附能力强的树脂;

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