开题报告内容：
研究背景：
维生素D是人体和动物维持生命和健康必不可少的要素。目前已知的维生素D至少有10种,但最重要的是维生素D2(麦角钙化醇)和D3(胆钙化醇),其中维生素D3因其稳定性更好,因此成为相关制剂首选原料,而测定维生素D3含量则成为分析重要内容。对于其原料药和相关制剂，中国药典2010版(ChP2010)，美国药典34版(USP34)，欧洲药典7.0版(EP7.0)，均有收载。维生素D3在体内经肝、肾代谢后转变为1,25-二羟基维生素D3,具有促进小肠对钙吸收的作用,能够有效预防婴幼儿缺钙、老年骨质疏松和骨折,所以一些保健食品如牛乳钙片、钙尔奇D等钙营养强化制剂中添加微量的维生素D3,以促进人体对钙的吸收。维生素D3在乙醇,丙酮，三氯甲烷，乙醚中易溶，在植物油中略溶，在水中不溶。维生素D3有关物质，主要是其光热转化异构体,包括前维生素D3(pre-vita-minD3)反式维生素D3(trans-vitaminD3)和速甾醇D3(tachysterol3)。异构体相互间结构差异较小，用反相HPLC分离较难，目前尚无反相HPLC法测定维生素D3有关物质的报道。本法中有关物质的测定方法采用的是正相高效液相色谱法。
根据中国药典2010版，维生素D的含量测定按维生素D测定法（附录ⅦK第一法）。现做简要介绍。对照品储备溶液的制备：根据各制剂中所含维生素D的成分，精密称定相应的维生素D3对照品25mg，置100ml棕色瓶中，加异辛烷稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液（1）；精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，作为储备溶液（2）。色谱条件与系统适用性试验：用硅胶为填充剂；以正己烷-正戊醇（997：3）为流动相；检测波长为254nm。量取维生素D3对照品储备液（1）5ml，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，90℃水浴中加热1h，冷却加正己烷5ml,摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8w主波长分别为254nm和365nm的紫外灯下，将石英吸收池斜放成45，并距灯管5-6cm，照射5cm。量取该溶液注入液相色谱仪，进样5次，记录峰面积，维生素D3峰的相对标准偏差应不大于2.0%，前维生素D3峰（与维生素D3相对保留时间约为0.5）与反式维生素D3峰与维生素D3相对保留时间约为0.6）以及维生素D3峰与速甾醇D3峰（与维生素D3相对保留时间约为1.1）的分离度均大于1.0。响应因子测定：精密量取对照品储备溶液（2）5ml，置50ml量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。注入液相色谱仪计算维生素D3的响应因子f1。另取对照品储备溶液（2）5ml，置50ml量瓶中，加2,6-二叔丁基对甲酚结晶1粒，通氮排空气，90℃水浴加热1.5h，用正己烷稀释至刻度，注入液相色谱仪计算前维生素D3的响应因子f2。.含量测定：取供试品溶液进行测定，计算维生素D3和前维生素D3折算成维生素D3总量。然而在实际的实验操作中采用中国药典2010版维生素D测定法第一法并不能符合相关分离度要求且经多次试验及相关计算发现回收率不达标，故对课题钙加维生素D3软胶囊的含量测定采用其他相关前处理方法及含量测定方法。
研究方法：
1.供试品溶液的制备
精密量取供试品溶液适量（相当于维生素D3总量600单位以上，总量不超过2.0g），置皂化瓶中，加乙醇30ml，维生素C0.2g，50%氢氧化钾3ml（若供试品为3g，则加50%氢氧化钾4ml），置水浴上加热回流30分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内壁，将皂化液转移至分液漏斗中，皂化瓶用水60ml-100ml分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振摇提取三次，第一次60ml,以后每次40ml，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约100ml,洗涤时应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇酚酞指示液不显红色，静置，分取乙醚提取液，加入干燥滤纸条少许除去乙醚提取液中残留的水分，分液漏斗及滤纸条用少许乙醚洗涤，洗液与提取液合并，置具塞圆底烧瓶中，在在水浴中低温蒸发至约5ml，再用氮气流吹干，迅速精密加入甲醇3ml，密塞，超声处理助溶后，移入离心管中，离心，取上清液作为供试品溶液。
2.对照品储备溶液的制备
精密称定相应的维生素D3对照品25mg，置100ml棕色瓶中，加异辛烷稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液（1）；精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，作为储备溶液（2）。
3.色谱条件与系统适用性试验
