开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
1. 研究或拟解决的问题
慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种以气流受限为特征的可预防及可治疗，但不可逆转的肺部疾病，具有渐进性肺功能减退的特征，对肺组织及肺血管系统呈侵袭性破坏[1]。慢性阻塞性肺病目前依然是一种无法治愈的全球性重要疾病，在美国的慢性病残率及死亡率中排第4位[2-4]。COPD是一种全身性疾病，肺为主要受累部位，会导致呼吸困难，病情会越来越重，而且不可逆，其特征为病情恶化、呼吸恶化或肺痛，在疾病后期还可出现骨骼肌功能减退、肌肉废用、骨质疏松等症状。肌肉功能减退会导致患者衰弱、乏力，并可能影响COPD的预后。这种复杂的临床状况与代谢改变、蛋白质合成与破坏失衡、细胞水平增殖、分化及生存不平衡等有关[5]。世界卫生组织 (WHO) 估计，全球有8000万人患有中度到重度的慢性阻塞性肺病。2005年，300多万人死于此病，占到全球死亡人数的5%。世界卫生组织预测，如果还不采取紧急行动来减少潜在性风险因素，尤其是吸烟，那么未来10年里死于此病的总人数将上升30%以上[6]。
罗氟司特是一种可用于COPD的新型辅助药，可选择性作用于磷酸二酯酶-4，即PDE-4，已显示可减轻其发作并提高患者的肺部功能[7]。PDE-4主要存在于肺组织，为一种主要的3，5-环磷酸腺苷 (cAMP)代谢酶。在细胞水平PDE-4可使cAMP转化为单磷酸腺苷(AMP)，进而使cAMP介导的细胞信息传递过程中止。罗氟司特可阻滞PDE-4的作用，使cAMP在靶细胞内聚积，从而加强cAMP介导的信息传递作用,具有一定的抗炎作用，故对于COPD具有较好的治疗意义。在体内试验中，罗氟司特可通过肝脏Ⅰ相，即细胞色素P450CYP酶代谢，和Ⅱ相结合反应代谢。其主要代谢途径是通过几种CYP酶(CYP1A2，CYP2C19，和CYP3A4)介导的，这些酶催化罗氟司特产生N-氧化反应，从而产生具有较弱抗炎活性的罗氟司特N-氧化物[1]。
在研究罗氟司特在COPD患者体内的药代动力学特征的过程中，应对罗氟司特及其活性代谢产物N-氧化罗氟司特的在血浆中的浓度进行测定。
2.研究进展
关于罗氟司特的定量测定方法已有文献报道，Barhat等人采用高效液相色谱配置紫外检测器（HPLC-UV）对罗氟司特进行定量测定[8]。而液相色谱串联质谱法方法（LC-MS/MS）由于在灵敏度、特异性、分析速度等方面的优势，在生物分析中的应用越来越广泛。目前已有液相色谱串联质谱法对生物基质中的罗氟司特及N-氧化罗氟司特进行测定的报道。Knebel等人报道了LC-MS/MS法测定罗氟司特及N-氧化罗氟司特在人血浆中的浓度，仪器采用API4000型三重四级杆质谱仪，以选择性反应离子监测（SRM）模式测得线性范围在0.1 ng/ml至50ng/ml，即定量下限为0.1ng/ml[9]。而Sat.等人利用LC-MS/MS方法测定大鼠血浆中IC87114、罗氟司特（RFM）、N-氧化罗氟司特（RFN），并应用于药物药物相互作用的研究中[10]。
3. 采用的研究手段
近年来，液相色谱-串联质谱技术已广泛应用于药物开发阶段的药代动力学和药物代谢物研究。液相色谱串联质谱技术结合了色谱及质谱的优点，将色谱的高分离性能和质谱的高鉴别特点相结合，提高了对样品分析的灵敏度及选择性，并能提供化合物的相对分子量和结构信息。在对药物的定量研究中，常用的质谱为串联四级杆质谱，常用的生物样品有全血、血浆、尿液、粪便、组织等，通过沉淀蛋白、液液萃取、固相萃取等技术对其进行预处理后进行测定。所采用的电喷雾离子源是在生物质谱分析中最常用的离子源之一[11]。
本实验拟采用岛津LC-30AD液相色谱系统和AB SCIEX TRIPLE QUARD 6500三重四级杆串联质谱，通过对样品预处理条件，色谱条件及质谱条件等方面优化，建立灵敏、快速、专属性好、定量下限更低、操作简便的液相色谱-串联质谱方法测定猴血浆中罗氟司特及其N-氧化代谢物的浓度，以期应用于药物代谢动力学研究中。
