基于OVA制备抗生素抗体文献综述

一、课题背景

抗生素作为广泛治疗各种细菌感染和致病微生物感染的药物，其来源主要是微生物的代谢产物，同时也可以通过人工合成进行制造，现在不仅在临床上被大量使用，还被广泛用于动物养殖业，与人类的生活和生命健康息息相关。抗生素的种类繁多，天然存在的抗生素主要包括了beta;-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内脂类和氯霉素类等^[1]，人工合成的抗生素主要有喹诺酮类、磺胺类和其他合成的抗菌药。

抗生素自从被发现以来就在人类医学上得到了广泛应用，但是抗生素滥用带来的抗药性和二重感染等问题已经对人类的生命健康造成了威胁。动物源性食品中存在的抗生素残留物超过最大含量或残留限量是世界范围内公认的重要食品安全和健康危害问题，食品中残留的抗生素可能导致产生抗药性菌株，敏感个体的超敏反应，肠道菌群失调等危害^[2]。因此抗生素需谨慎使用，必须遵照医嘱和国家相关规定，同时也需要对抗生素进行准确的检测，以确保其含量低于最低标准^[3]。

综合相关的文献资料，检测抗生素的方法主要可以分为三类，包括微生物检测法、仪器检测法和免疫分析法。微生物检测方法的主要原理是根据抗微生物药对特异微生物的抑制作用，来定性或定量检测受检样品中残留的抗微生物药。仪器检验方法是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或性质来测定其含量，进行定性定量和药剂鉴定。免疫分析方法是基于抗原和抗体的特异性反应进行免疫分析。抗生素残留的检测方法中微生物检测应用较为广泛，是抗生素残留检测的传统方法，但是此法测定时间长，结果误差较大，操作复杂。仪器检验方法主要包括高效液相色谱法、液相色谱法、质谱法和联用技术等，灵敏度较高，但前处理方法复杂、仪器设备的价格成本较高且不能进行大量样品的快速检测。免疫分析方法中应用较多的有酶联免疫吸附和胶体金免疫层析技术，主要优点是便宜，快速，适用于高通量筛选，不需要昂贵大型检测设备或专门的操作人员，便于现场检测。

二、 要解决的问题

抗生素作为治疗细菌感染的主要药物，具有强大的抗菌作用，因此被大量应用于人类和动物的各种感染性疾病，但是滥用抗生素带来的各种问题亟待解决。对抗生素进行检测是为了确保其含量低于最低限度，保证人们的生命健康和用药安全。免疫分析方法具有多种优点，是残留抗生素检测的有效手段，因此建立一种针对头孢呋辛和头孢西丁两种头孢类抗生素的免疫分析检测法有利于对这两种抗生素进行高效、准确的检测。根据免疫分析法的技术特点，人工抗原的成功制备是建立免疫分析方法的第一个关键步骤^[4]。本实验旨在为建立一种便捷快速、高效灵敏的免疫分析方法来检测抗生素残留进行基础研究。要解决的问题是选择合适的合成方法来使头孢呋辛和头孢西丁两种抗生素与蛋白质载体BSA结合成人工抗原，为下一步制备抗体并建立高效的检测方法打下基础。

三、 可行性分析

头孢呋辛和头孢西丁都属于第二代头孢菌素类抗生素，由于其分子量较小，只具有反应原性，可以与对应的抗体发生特异性结合反应，但是缺乏免疫原性，进入机体后机体后无法直接诱导机体产生特异性抗体，产生免疫反应，属于不完全抗原（半抗原）。因此需要将抗生素与大分子载体进行偶联，形成完全的人工抗原。完全抗原进入机体后才可以诱导B细胞进行增殖分化，最终产生特异性抗体。因此人工抗原的合成是制备抗体的基础和关键步骤。

现在常用的用于人工抗原合成的载体主要可以分为三大类:蛋白质、多聚肽和大分子化合物^[5]。其中蛋白质类载体较为常用，主要有牛血清蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)、白喉类毒素(DT)、钥孔血蓝蛋白（KLH)等。BSA是牛血清中的一种球蛋白，分子量为66.43KDa，包含583个氨基酸残基，具有较多的可与半抗原结合的位点，且理化性质稳定，价格便宜，来源方便。因此本实验选取BSA作为载体蛋白合成抗生素人工抗原。