开题报告内容:
一、课题的研究背景
细胞自噬是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后,送入溶酶体或液泡中进行降解并得以循环利用。近年来,自噬与各种疾病的关系被广泛研究,而探讨细胞自噬方面各类疾病的发病机制和治疗途径也成为了一个研究热点。
LC3(微管相关蛋白1轻链3)是自噬的一个重要指示分子,也被广泛视为自噬标志物,自噬体中LC3的存在,及其向低迁移形式的 LC3-Ⅱ的转化被作为自噬发生的指示器[1]。若LC3表达水平降低,则提示自噬体形成减少,细胞自噬下调[2]。基于LC3的一系列重要的生物学意义及与自噬之间的调节关系,本实验利用分子克隆技术构建LC3真核过表达质粒载体,并通过免疫荧光的方法检测其与Notch1相关蛋白的结合情况,对未来进行相关疾病的研究打下一定基础。
二、主要解决的问题
1.构建LC3真核过表达质粒。
2.LC3过表达HaCaT稳转细胞系的构建。
3.研究LC3与Notch1相关蛋白结合情况。
三、采用的研究手段
1.构建LC3真核过表达质粒
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