MyD88基因干扰慢病毒载体的构建与鉴定文献综述

1. 研究背景

哺乳动物利用免疫系统防御病原体入侵。免疫系统分为两种，先天性免疫和获得性免疫，其中先天性免疫在机体免疫中占核心位置。Toll样受体（即TLRs）是先天性免疫反应感受器的主要家族，它可以利用细胞外区识别不同病原体表面共有的病原相关分子模式，然后引发细胞内信号传导及炎症递质释放，最终启动宿主的免疫反应。TLR 信号可以通过选择性识别病原体中病原相关分子模式的保守结构，来实现对入侵病原体的早期识别，从而激活天然免疫。同时它还可以通过上调抗原提呈细胞表面的共刺激分子及其分泌的炎症细胞因子，诱导 T、B 淋巴细胞分化为效应 T、B 淋巴细胞，从而调节获得性免疫。此外，过度的TLR信号也会影响自身免疫病的发生。因此，对TLR信号通路的研究成为了免疫学研究重点。

TLR信号通路分为四个亚系统，即beta;干扰素TIR结构域衔接蛋白依赖通路、小GTP酶通路、磷脂酰肌醇通路和My D88依赖通路。其中MyD88依赖通路是除TLR3外所有TLR共用的通路，因此，MyD88依赖通路是最主要的 TLR 信号通路。MyD88分子最初在髓样细胞的分化中被发现，由296个氨基酸残基组成，它具有2个特殊的结构域， 包括N端的死亡结构域与C端的TIR结构域。其中N端的死亡结构域能与其他具有死亡结构域的蛋白相作用，与 TLR 介导的细胞凋亡有关， C端的TIR结构域能与TLR上的TIR结构域相作用。除此之外My D88 也有中介结构域，在 TLR信号通路中起激活下游促炎细胞因子的作用。

MyD88在 TLR信号通路中位于节点位置，是 TLR 信号转导途径中的主要接头蛋白，作用为承上启下，传导激活信号，激活下游多种转录因子，从而协助促炎细胞因子和其他一些机体防御蛋白的转录，最终启动先天性免疫应答。因此，MyD88在先天性免疫反应中扮演了重要的角色，被认为是重要的临床治疗靶点。对MyD88及其依赖的信号通路的研究，将使人们对免疫应答有更深入的认识。

2.研究目的

本课题将构建Myd88基因干扰重组慢病毒载体，与慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，获得高滴度的慢病毒颗粒，感染靶细胞确定Myd88基因沉默，探索稳定地构建Myd88基因干扰重组慢病毒载体使Myd88基因沉默的方法，为Myd88及其依赖的信号通路的研究提供材料。

3.拟研究的问题

1）shRNA慢病毒载体的构建方法：Myd88干扰基因慢病毒载体构建。

2）慢病毒包装过程：Myd88干扰基因慢病毒包装和病毒滴度测定