1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.本课题的意义灵芝是一种传统的药用真菌，含有多种活性成分，其中灵芝三萜是其主要的药效成分【1】。
在灵芝的传统栽培过程中受环境影响较大而且生长周期较长，对灵芝的产量以及灵芝体内的成分都会产生极大影响，一定程度上限制了从成品灵芝中获取生物活性物质的含量。
因此，为获得较高含量的灵芝三萜，研究者逐渐改良和优化灵芝的深层发酵条件。
4. 研究创新点
1.利用rnai沉默方法研究了灵芝中14-3-3蛋白的功能，发现14-3-3参与调控灵芝三萜的生物合成2.同以往研究蛋白质蛋白质之间相互作用的实验手段相比，双杂交系统具有其独特优势。
首先，融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行，蛋白质有可能保持天然的折叠状态，类似其在体内生理状态下的情况，这是其他离体生化检验方法所缺乏的，因此较之后者，它所证实的蛋白质间相互作用将更接近于在体的真实水平。
其次，双杂交系统的敏感度即高，可以检测到在蛋白质之间结合常数低至 1mmol/l 左右的微弱作用。
5. 研究计划与进展
本项目预计在6个月内完成，具体研究计划如下：2017.10.01-2017.11.01检测在水杨酸处理下野生型菌株的灵芝三萜和中间代谢产物含量以及灵芝三萜关键酶基因的转录水平，重点考察该条件下灵芝ROS含量和14-3-3的转录水平的变化，确定14-3-3蛋白参与灵芝酸的生物合成2017.11.01-2017.12.01应用灵芝基因沉默体系构建14-3-3沉默突变体，2017.12.01-2018.01.01检测在水杨酸处理下野生型菌株和突变体菌株的灵芝三萜、中间代谢产物和ROS的含量，以及灵芝三萜关键酶基因的转录水平，研究14-3-3基因在ROS信号途径中调控灵芝酸合成中的作用2018.03.01-2018.03.15构建BD/14-3-3，AD/NoxR和AD/NoxB的融合表达载体2018.03.15-2018.04检测BD/14-3-3转化酵母，对转化子进行自激活检测2018.04-2018.05.20通过酵母双杂技术进行14-3-3与Nox蛋白的互作鉴定
