血红素对一种细菌铁蛋白突变体的铁催化活性影响研究开题报告

1. 研究目的与意义

大肠杆菌铁蛋白是由二十四个亚基组成独特的八面体球状结构，溶液中亦存在其等量二聚体，其高度对称的空间结构是以C4，C3和C2对称的形式紧密相互排列而形成的，亚基间通过盐桥及氢键作用联接，综观现阶段研究，迄今为止，亚基单体能否在溶液中稳定存在以及铁蛋白的自组装机理在科学界仍没有公认的答案。通过前人研究发现，M52A突变体会导致细菌铁蛋白失去血红素，且对在催化活性上与野生型相差不大。而D118Y使蛋白形成更稳定的致密球状结构，本研究这种形成致密更稳定结构的突变体D118Y/M52A在催化活性上的变化。

2. 国内外研究现状分析

许婉芳等(2011)通过PCR技术扩增出人铁蛋白基因，经酶切后与表达载体连接，重组质粒转化感受态大肠杆菌，利用菌落PCR，质粒双酶切，测序，成功的构建了人铁蛋白基因表达载体，利用IPTG对重组菌进行诱导表达，通过尿素洗涤纯化目的蛋白用于制备抗体。

GotoF.等（2000）将由35S启动子驱动的大豆铁蛋白基因，通过农杆菌转入莴苣后，发现含铁量明显提高。

3. 研究的基本内容与计划

第一阶段定点突变（引物设计反向pcr琼脂糖凝胶的验证去模板纯化）

第二阶段蛋白表达纯化（活化扩增加iptg诱导收菌超声波纯化）

最后表征

4. 研究创新点

近年来研究发现，众亚基由一种含铁的辅因子即血红素通过连接B链上的蛋氨酸而形成整体，而D118Y使蛋白形成更稳定的致密球状结构，本研究这种形成致密更稳定结构的突变体D118Y/M52A在催化活性上的变化。