1. 研究目的与意义
本课题旨在探索重组单克隆抗体的纯化工艺，验证抗体纯度，研究抗体在常规缓冲液中的溶解度，并对抗体在反复冻融、高温、酸性碱性环境和长时间存储等压力条件下的稳定性进行检测。本课题利用SEC-HPLC 获得所研究抗体在溶液中的物理化学参数，判断该抗体的存储稳定性，从而对后续的研发工作提供重要数据。
2. 国内外研究现状分析
抗体是一种功能多样的实验室必备检测试剂,如免疫组化、免疫印迹、免疫沉淀、酶联免疫吸附试验(elisa)等都要用到抗体。单克隆抗体主要来源于杂交瘤细胞培养上清和免疫动物的腹水,不论抗体是何种形式的来源,在使用之前都应进行纯化。单克隆抗体的纯化方法大致可分为沉淀法和色谱法两大类,沉淀法一般操作简单,省时省力,回收率高,但纯度有限;色谱法相对而言操作较繁琐,但是所获抗体纯度较高,可以满足精密试验对抗体的需要。应根据需要来选择抗体纯化的方法。
protein a亲和层析：protein a是金黄色葡萄球菌细胞壁的一种蛋白质成分，它是一种单一的多肽链，分子质量为42000u，分为5个片段，每个片段都具有和igg的fc片段相结合的活性。protein a能和大部分哺乳动物的igg反应，不同属种的抗体对protein a的亲和能力不同。据此可将protein a作为配基结合在各种凝胶上用于分离igg亚类。其优点有选择性好，一步纯化所得抗体纯度大于99％；可浓缩抗体，洗脱液的抗体浓度大于10g/l；可有效灭活病毒，适用于所有人源的（非igg3）抗体和fc融合蛋白；减少缓冲液的种类和用量；该方法是目前使用最普遍的单抗纯化方法之一。但由于protein a具有生物活性，其与传统化学配基相比仍存在一些问题。protein a凝胶价格昂贵；抗体在低ph条件下洗脱易形成高分子聚合物和沉淀；脱落的protein a配基会和抗体一起被洗脱，影响抗体的安全性；层析使用周期短；易被存在于样品中的蛋白酶水解，降低分离效果；缺乏有效的清洗方法，由于在碱性环境下不稳定，不能用一般的氢氧化钠原位法。
对于单克隆抗体来说,有关其贮存中稳定性的报道很少。研究抗体在常规缓冲液中的溶解度，并对抗体在反复冻融、高温、酸性碱性环境和长时间存储等压力条件下的稳定性进行检测，其目的在于评价各种方法在考察单克隆抗体稳定性时的利弊，判断该抗体的储存稳定性。
3. 研究的基本内容与计划
研究内容：
1、利用protein a 亲和层析纯化细胞表达的重组单克隆抗体并做初步的性质分析；
2、利用sec-hplc 研究该抗体在反复冻融、高温、酸性碱性环境和长时间存储等压力条件下的稳定性。
4. 研究创新点
随着技术的不断突破，单克隆抗体药物在制药领域占据的份额不断增加。在研发和生产过程中，抗体的纯化制备过程以及存储条件的选择会影响到抗体的纯度和生物学活性。同时抗体的稳定性研究会对下游生产工艺、制剂研究以及最终产品的质量和安全性有重要的指导意义。
