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1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
沙雷氏菌（serratia）广泛存在于动物、植物与人体肠道等环境中兼性厌氧的革兰氏阳性菌[1]，是常见的条件致病菌[6]。本实验中所用到的fs-14菌株（serratia sp. fs14)是本实验室前期从白术的茎杆中分离得到的。
酶能够催化生物体内绝大多数生物化学反应，酰基转移酶更是对维持机体正常生命活动以及一些疾病的发生都密切相关[2]。近年来 n-乙酰转移酶（n-acetyltransferase，nat）多态现象与肿瘤的相关性研究也越来越受关注[4]。nat2在体内参与二十多种药物的代谢,nat2代谢能力存在遗传多态性[8]。nat能够调节细胞周期促进细胞繁殖，也能通过多种不同的分子信号通路抑制细胞运动能力。nat具有众多的作用靶点，以及复杂的调控网络，使其在细胞增值、凋亡、运动、肿瘤发生等多种生理病理过程中都起着至关重要的作用。n- 乙酰化转移酶是氨基药物和外源化学物代 谢过程中重要酶系 ,它在体内药物代谢和有毒物质 转化上有重要作用 [11] 。已有研究表明，快速nat1乙酰化基因型与慢速nat2乙酰化基因型结合产生的dna加合物在人类膀胱中水平最高时，其膀胱癌发生率也最高，且在肺癌方面也有类似的情况发生。nat1和nat2乙酰化多态性都对前列腺癌的风险有轻微的影响，但结合起来，增加的风险是附加的[10]。其他致癌代谢酶的多态性也可能增加患病风险[9]。尽管在动植物中对n-乙酰转移酶的功能研究非常深入，但是在细菌中大多数n-乙酰转移酶的功能都不明确，除了少数n-乙酰转移酶的功能比较明确外，毕赤酵母gs115中的n-乙酰转移酶能够提高菌体抗ros胁迫的能力，促进细胞生长[7]。
沙雷氏菌基因组中有接近30种n-乙酰转移酶[5]，除了少数与抗生素抗性有关外，其它的酶的功能均不清楚，fs14中的l085_11075和l085_21670号基因的就是编码nat。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
①对沙雷氏菌（serratia）中两种n-乙酰基转移酶进行克隆，表达以及纯化。
②构建目的基因的表达载体，并转化入大肠杆菌，保存菌种。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法
本实验拟采用基因克隆、载体构建、酶切检测、异源表达、蛋白纯化等一系列方法完成实验。
2.技术路线
4. 研究创新点
1）生物体内的蛋白质有多种存在形式，要想研究其结构、特性等需进行基因构建和克隆表达，再分离纯化目的蛋白进行研究。
2）近年来，n-乙酰转移酶与各类疾病之间的关系备受关注，所以研究该蛋白，有潜在的应用价值。
3）在研究技术上，采用生物化学、微生物学、分子生物学等方法，体现了交叉学科研究的特点，使本项研究质量水平得到保证。
5. 研究计划与进展
2018.09——2018.10
前期工作：相关文献的检索、查阅
2018.10——2018.11
