木聚糖酶的结晶开题报告

 2022-01-23 20:35:11

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

半纤维素是聚合碳水化合物,是在植物细胞壁中与纤维素紧密结合的几种不同类型的多糖混合物,包括木聚糖、葡萄糖甘露聚糖、阿拉伯木聚糖、木葡聚糖、半乳葡萄甘露聚糖等多种组分。

半纤维素是自然界中第二大丰富的多聚糖,而木聚糖是半纤维素中的主要成分,它在被子植物中占干重的15%~30%;在裸子植物中木聚糖含量占7 %~12 %。

木聚糖是一种复杂的多糖类物质,其主干由β-1,4-糖苷键将β-d吡喃木糖连接成多聚物;在多聚物主链β-d-吡喃木糖残基的o-2或o-3位置上连有4-o-甲基-α-d-葡萄糖醛酸。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:找到木聚糖酶单体结晶与木聚糖酶和底物共结晶条件研究内容:木聚糖酶结晶拟解决的关键问题:找到木聚糖酶和底物的共结晶条件并优化

3. 研究的方法与方案

研究方法结晶试剂大规模筛选后,初步找到结晶条件并加以优化技术路线及实验方案木聚糖酶单体结晶木聚糖酶结晶条件用悬滴法来进行摸索: 木聚糖酶的无配体蛋白溶液( 30 mg/ml 木聚糖酶,0. 1 mol/l nacl,0. 1mol/l tris ( ph8. 5) ) 与1 μl 池液( 具体成分视 结晶条件试剂盒的成分而不同) 混合后,与 0. 5 ml 池液在封闭的环境下平衡. 木聚糖酶与底物共结晶木聚糖酶和底物木聚六糖 ( xylohexaose) 形成的复合物的结晶条件用悬滴法来进行摸索: 1 μl 复合物溶液( 30 mg/ ml 木聚糖酶,0. 1 mol/l nacl,0. 1 mol/l tris,ph8. 5, 50 mmol/l xylohexaose) 与 1 μl 池液( 具体成分视 结晶条件试剂盒的成分而不同) 混合后,与 1 ml 池液在封闭的环境下平衡.点完板后立即观察,4小时后观察一次,第二天再观察,有的条件会很快形成晶体,很快溶解。

在其中找出晶体长得比较好的条件。

可行性分析指导老师万教授在生物领域有多年的研究经验,在木聚糖酶的结晶方面有很深的造诣,并提供了悉心指导和建议;本人阅读了大量文献,总结了前人实验的经验,做好了充足的知识储备,积累了很多理论及实践经验,使得这次实验能够顺利完成。

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4. 研究创新点

木聚糖酶的单体结晶条件已经有人做过结晶并重复成功,但现今还没有人做过木聚糖酶与底物的共结晶条件方面的研究。

5. 研究计划与进展

分三个阶段:1.从2016年11月到2017年1月a.查阅相关文献;b.设计实验方案。

2.从2017年2月到2017年4月a. 进行实验3. 2017年5月a.撰写论文;b.进行毕业答辩。

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