寡养单胞菌纤溶酶(ProX14)的分离纯化开题报告

 2022-01-29 19:05:04

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

纤溶酶指的是能够溶解构成血栓的主要成分纤维蛋白的酶。

在生物化学中,纤维蛋白溶解简称为纤溶。

在人体血液中,存在着凝血系统和纤维蛋白溶解系统,它们各受一系列酶促反应的调节,正常生理状态下,这两个系统保持动态平衡,既保证血液有潜在可凝固性,又保证血液的流体状态。

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2. 研究的基本内容和问题

血栓栓塞性疾病主要是由于纤溶系统的异常所引起的。

血栓疾病的临床治疗方法主要有外科手术、抗栓疗法、溶栓疗法,近年来也探索了一些新型治疗手段,如超声波治疗、激素取代治疗、基因治疗、介入治疗、细胞治疗等,与其他治疗方法相比,溶栓治疗效果好、费用低。

目前临床已使用的溶血栓药物有链激酶(sk)、尿激酶(uk)、组织型纤溶酶原激活剂(t-pa)等,这些药物具有较好溶栓效果,但是还存在一些副作用,例如这些药物大多存在着溶栓特异性不高、在血液中的半衰期短、用药后会出现一系列不良反应、而且价格昂贵。

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3. 研究的方法与方案

1.筛选纤溶酶菌株方法:步骤:土壤细菌的分离,纤溶酶活力测定,纤维蛋白平板的制作,尿激酶标准曲线制作,菌株复筛,纤维蛋白平板法测定样品纤溶酶活,发色底物法测定纤溶酶活。

2.菌种鉴定:步骤:菌落形态特征鉴定,菌株形态观察,生理生化特性测定。

3.纤溶酶粗酶液样品制备:步骤:发酵液获取,发酵液预处理。

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4. 研究创新点

1.本实验是对于单一菌种的分离提取培养,所以在上述过程中,要严格保证无菌操作,一旦染菌将前功尽弃。

2.本实验最终产物纤溶酶蛋白的出产率很低,4l细菌发酵液只产出毫克量级的有用蛋白。

因此完成本事眼需要大量培养tsg4细菌,收获大量的发酵液,才能得到足够的纤溶酶蛋白进行理化分析。

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5. 研究计划与进展

2013.11-12土壤中分离出具有纤溶酶活力的菌株,作为候选菌株2014.2-2014.3将候选菌株进行菌种鉴定2014.3-2014.4 将候选菌株所得的纤溶酶粗酶液进行酶学性质研究,对粗 酶液进行分离纯化2014.4-2014.5补充实验及论文答辩

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