1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.本课题的研究意义
应激反应是动员机体的防御机能克服刺激原的不良作用, 保持机体在极端情况下的稳定, 是一种生物学特殊的合理状态, 机体在长期的进化过程中形成的一种扩大适应范围的生理反应[1]。奶牛热应激是指当外界温度超过奶牛生存适宜的温度范围时,机体对这一变化所发生的反应,其目的是动员机体的防御机能,以克服高温刺激源的不良作用,保持机体在极端情况下的稳态[2]。当奶牛体温高38℃,呼吸次数超过80 次/min,采食量降低10%~15%,产奶量降低10%~20%,湿度指数大于72时,奶牛即处于热应激状态[3]。奶牛热应激是生产过程中的常见现象,会造成采食量、消化率下降,繁殖性能下降,营养不良及奶品质下降等诸多问题。
生产上采取许多措施来缓解热应激,多年来也取得显著的成效。近年来科研工作者将目光转向细胞机制研究方向,尤以mapks信号通路为主,而p38信号通路作为mapks家族的重要成员也具有重要的研究意义,近期研究显示热应激可以诱导激活p38信号通路,进而调节机体的生理水平[4]。另有实验表明,p38信号通路抑制剂可显著抑制轻度热应激所造成的不良反应[5]。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
1.1成功培养奶牛乳腺上皮细胞至传代
取屠宰场采集的奶牛乳腺组织块,经剪碎、清洗、铺板、换液、消化等步骤在培养瓶中成功培养出传代的奶牛乳腺上皮细胞,用于各项试验探究。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法和方案
1.1采样
此次试验采取屠宰场新鲜屠宰的中国荷斯坦奶牛乳房,采样时,将切割下来的奶牛乳房用1l浓度为75%的酒精冲洗两遍,再用加入5ml双抗的500ml 1pbs冲洗一遍,带回实验室。
4. 研究创新点
1.研究内容新颖
本次试验的研究内容为p38信号通路抑制剂对热应激乳腺上皮细胞抗氧化的影响,国内外很少有涉及乳腺上皮细胞p38信号通路研究的,对其抑制剂与热应激关系的研究也很少,研究内容标新立异。
2.研究意义重大
5. 研究计划与进展
1.研究计划
第一阶段(2015.092015.11)学习奶牛乳腺上皮细胞的细胞培养技术,掌握实验的总流程
第二阶段(2016.03)实验准备,完成采样、细胞培养、抑制剂热处理、抗氧化指标的测定
