蛋白酶体抑制剂体外检测方法的建立开题报告

1. 研究目的与意义

蛋白酶体抑制剂通过阻断泛素蛋白酶体通路，影响细胞内多个周期蛋白的降解，诱导细胞凋亡。

所以蛋白酶体抑制剂通过抑制蛋白酶体活性进而干扰和影响细胞原有的功能,尤其对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用。

体外试验已显示蛋白酶体抑制剂具有广泛抗肿瘤作用。

2. 国内外研究现状分析

蛋白酶体抑制剂硼替佐米（bonezomib，ps-341)是近年研究较多的一种蛋白酶体抑制剂。

也是唯一进入临床应用的小分子蛋白酶体抑制剂，既可以克服传统抗癌药物比较差的耐受性，又可以表现出极强的抗肿瘤活性。

体外检测方法的建立旨在检测蛋白酶体抑制剂的活性，国内外多数研究均是利用连续荧光监测法检测酶活性，蛋白酶体抑制剂抑制20s蛋白酶体活性，破坏细胞内蛋白质降解与合成的平衡，诱导细胞内参与周期、凋亡调控蛋白的积累，诱导细胞周期阻滞在g2-m期，激活细胞凋亡的一系列通路而使细胞死亡。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：本课题主要是建立体外检测蛋白酶体抑制剂活性的方法，主要检测蛋白酶体抑制剂的酶活性和细胞活性。

检测酶活性的方法是连续荧光检测法，利用三种底物分别作用于β1、β2和β5，当它们进入细胞后，3种蛋白酶对底物的特异氨基链进行识别，并发挥酶活性对其进行切割，被切割后的底物释放出游离的发光基团，可以通过荧光进行监测。

细胞内的酶活性与荧光值成正比例的关系，因此可通过这种方法对细胞体内蛋白酶体的酶活性进行测定。

4. 研究创新点

（1）通过PS-341对20S蛋白酶体和B16、Namalwa细胞蛋白酶体提取物抑制活性，证实了荧光连续监测法测定的可靠性。

（2）MTT方法能简单、快捷、准确地测定细胞的增殖反应，而且能避免由于人为操作因素造成的实验误差。