来自Caldicellulosiruptor saccharolyticus木聚糖酶的克隆表达及定性研究开题报告

1. 研究目的与意义

目的：获得大量高温重组酶，通过His-tag-Ni柱亲和层析获得纯酶，然后对纯酶进行酶学表征。

意义：为进一步探索高温酶在木质纤维工业上的降解应用打下较好的基础。

2. 国内外研究现状分析

近年来，极端微生物的应用越来越广泛，可应用于高温环境中帮助有机物降解，发酵工业中可用于多酶生产抑制剂，矿产工业中可应用于细菌浸矿、煤炭脱硫等，也可用于医药工业中生产抗生素，特别是基因工程中，以TaqDNA 聚合酶为基础的应用是基因工程中革命性的进步。

本实验研究的耐热木聚糖酶来自C. saccharolyticus，C.saccharolyticus 是一种嗜热厌氧纤维素分解细菌，能在75-80℃温度下正常生长，1987 年，它是在New Zealand 的淡水温泉流漂浮的木板上隔离得到的，后由于独特的生理特征而被分类为新属。对其分析可知，此菌包含有木聚糖酶、纤维素水解酶、木糖苷酶等多种水解酶。

3. 研究的基本内容与计划

内容：本研究拟使来源于极端嗜热菌caldicellulosiruptor saccharolyticus木聚糖酶在大肠杆菌系统进行异源表达及定性研究，先获得大量高温重组酶，通过his-tag-ni柱亲和层析获得纯酶，然后对纯酶进行酶学表征。从而为进一步探索高温酶在木质纤维工业上的降解应用打下较好的基础。

计划:

第一阶段（2015.12-2016.1月中旬）：培养细菌、pcr、目的蛋白的克隆表达；

4. 研究创新点

该嗜热木聚糖酶首次被克隆表达。