1. 研究目的与意义
细胞色素p450（cytochromep450或cyp450,简称cyp450）为一类亚铁血红素硫醇盐蛋白的超家族，它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢。
细胞中，细胞色素p450主要分布在内质网和线粒体内膜上，作为一种末端加氧酶，参与了生物体内的甾醇类激素合成等过程。
选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。
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2. 国内外研究现状分析
近年来，对细胞色素P450的结构、功能特别是对其在药物代谢中的作用的研究有了较大的进展。最新研究表明细胞色素P450还是药物代谢过程中的关键酶，而且对细胞因子和体温调节都有重要影响。
到目前为止，国内已经用毕赤酵母系统成功表达了几百种蛋白质，这些常识为人们认识分子生物学领域的许多问题已经毕赤酵母自身的背景奠定了实验基础。3. 研究的基本内容与计划
研究内容 及计划 | 研究内容： 1.构建好质粒同时突变两个点; 2.细胞色素450酶在毕赤酵母中的表达; 3.蛋白电泳条带验证及后续酶活测定和气质检验。 研究计划： 第1周第2周 查阅文献资料和开题; 第3周第6周 构建质粒、酶切验证; 第7周第10周 转毕赤酵母表达、蛋白电泳条带检测验证及后续酶活测定和气质检验; 第11周第12周 实验数据的整理与分析; 第13周第15周 撰写论文及细节的修正。 |
4. 研究创新点
目前，关于P450酶在毕赤酵母中的表达课题研究还很少，这项研究具有较强的现实应用意义。
P450酶催化的反应需要持续稳定的NAD（P）H的供应，这使得连续无细胞过程变得非常昂贵，如果P450酶能在毕赤酵母中成功表达，则可由廉价的NADH代替昂贵的NAD(P)H维持酶催化反应，这将大大降低反应成本，其应用前景和价值极佳。
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