基于毕赤酵母的脂肪酶表面展示系统的构建开题报告

1. 研究目的与意义

目的：筛选出合适的锚定蛋白和米根霉脂肪酶基因组合，将其高效均匀地展示在毕赤酵母表面,研究展示方式对展示酶活力、酶催化性质的影响.

意义：毕赤酵母展示系统所展示的脂肪酶具备高的温度稳定性、有机溶剂稳定性等优点。广泛地应用于洗涤剂、油脂与食品加工、有机合成、皮革与造纸工业以及生物柴油等领域，可以大幅降低脂肪酶的生产成本，又具广泛底物适应性的全细胞催化剂。

2. 国内外研究现状分析

利用脂肪酶的固定化、蛋白质工程、表面展示等技术提高脂肪酶的热稳定性、有机溶剂耐受性等以适应不同的应用要求成为近年来国内外脂肪酶研究的热点。

3. 研究的基本内容与计划

内容：(1)选择毕赤酵母作为宿主菌，选择的锚定蛋白为flo1p，分别构建ppiczb-flo1-prorol和ppiczb-flo1-gfp两种重组质粒，使prorol和gfp分别作为报告蛋白，在毕赤酵母中进行表达。(2)采用荧光显微镜检测和脂肪酶酶活测定，检测重组酶蛋白锚定于毕赤酵母表面的效果。

计划：（1）2011.2.21-2011.2.28查阅资料并准备实验

（2）2011.3.1-2011.3.15提取酿酒酵母基因组

4. 研究创新点

将标记荧光蛋白与目的蛋白分别融合于各自重组质粒中，分开表达。减少了传统标记蛋白与目的蛋白基因融合一起时，对目的蛋白酶基因活性中心的影响。