钙黏素和整合素家族蛋白用于精原干细胞的流式细胞仪分离效率初探开题报告

 2022-02-07 20:44:59

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题的意义

精原干细胞(spermatogonia stemcells,sscs)是一种位于睾丸曲精细管基膜的原始精原细胞,。精原干细胞可定向分化成精母细胞,由精母细胞形成精子,,有高度的自我更新,维持自身保持一定数量的能力,[1]其主要作用为传递遗传信息。精原干细胞来源于原始的生殖细胞,原始生殖细胞在胎儿曲精细管处,被支持细胞包绕后转化为生精母细胞,在出生后迁移到生精小管基膜部,分化为精原干细胞[2]。哺乳动物的精原细胞可分为两个亚群,一个是未分化精原细胞,另一个是分化中的精原细胞。未分化的精原细胞也可分为两类,一类是有自我更新能力的干细胞,另一类是有潜在自我更新能力的干细胞[3]。一般情况下,潜在干细胞可快速分化为分化中的精原细胞,而在特殊情况下,如睾丸受损时,可转变为有自我更新能力的干细胞。未分化的精原细胞有as,apr,aal型,一般认为as细胞是精原干细胞,但这三种皆有成为精原干细胞的潜能。分化中的精原细胞有a1—a4型,中间型和b型,由aal分化而来[4]

流式细胞分选技术 (facs) 是一种将精原干细胞与带有免疫荧光标记的抗体结合, 依据抗体的特异性,使目的细胞上带有荧光信号,再依据荧光信号收集目的细胞的技术。其测量速度较快且成功率较高,可以实行多参数测量,测量的结果精度高、准确性好。但是由于操作流式细胞仪对技术人员的要求较高,而且流式细胞仪的使用价格较为昂贵,导致其在精原干细胞上的应用还不广泛[5]。流式细胞仪是一种高速的定量分析和分选单细胞的仪器,其应用了荧光化学技术,激光技术,计算机技术和单克隆抗体技术等,从上世纪70年代起开始发展,并取得重要成就。如今,流式细胞仪的应用更为广泛,几乎在各个领域都有应用。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标

寻找能够应用于流式细胞仪的纯化精原干细胞的最佳钙黏素和整合素蛋白

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3. 研究的方法与方案

研究方法

(1) 两步法分离小鼠精原干细胞

(2) 不同抗体标记精原干细胞

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4. 研究创新点

特色或创新之处

(1) 比较不同抗体对精原干细胞的流式细胞仪的分选效率

(2) 寻找最适合用于分选精原干细胞的抗体

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5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

(1)2019.06—2019.12 学习分离小鼠sscs,并鉴定sscs

(2)2020.01—2020.03 标记抗体,使用流氏细胞仪分选

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