1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
养羊业在我国畜牧产业中占有十分重要的地位,但是我国多数绵羊品种繁殖性能较低,严重制约了养羊产业的发展,因此充分发挥多羔绵羊的繁殖优势对养羊业效益的提高和产业的发展有重大意义。湖羊在我国有着悠久的养殖历史,是世界闻名的多羔绵羊品种,具有性成熟早、发情期长和繁殖率高的特点,拥有优良的遗传性能和生产性能。近年来湖羊被我国许多地区引入,但受到气候条件、饲养条件等因素的影响,湖羊的生殖优势没有得到充分的发挥。
l-精氨酸(l-arg)是一种在动物体内具有多种生理功能的重要氨基酸,可对多种生理活动进行调节。有研究表明补充l-arg可以调节子宫内的新陈代谢,提高子宫和胎盘的抗氧化能力,改善怀孕绵羊的生产性能。过氧化氢酶(cat) 在动物组织中普遍存在,可以催化很多反应,具有消除过氧化氢(h2o2)、酚类和胺类毒性的双重作用。超氧化物歧化酶(sod) 是生物体内重要的抗氧化酶,可以消除生物体在新陈代谢过程中产生的氧自由基等有害物质。氧化应激是很多疾病的诱因,cat和sod在保护机体免受氧化应激损伤中起着重要作用,多种环境因子对生物生理生化过程的影响可以通过生物体内cat和sod的水平表现出来。
本课题通过饲养试验探究l-arg对限饲湖羊子宫内膜氧化-抗氧化能力的影响,体外细胞培养试验进一步探究l-arg对湖羊子宫内膜上皮细胞抗氧化能力和细胞活力的影响,并进一步探究其调节机制。通过本课题,有望初步说明l-arg对湖羊子宫内膜抗氧化水平的影响与机制,为通过调节营养来改善绵羊子宫生理活动提供理论依据。
2. 研究的基本内容和问题
研究内容:本课题通过饲养试验和体外细胞培养试验探究l-arg对湖羊子宫内膜上皮细胞抗氧化能力和细胞活力的影响,并进一步探究其调节机制。
1. 饲养试验对湖羊进行同期发情,分组进行限饲或补充l-arg处理。在湖羊发情时屠宰,采集子宫内膜组织样本,利用elisa方法检测丙二醛(mda)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(gsh/gssg)水平变化,抗氧化酶cat和sod2的活力变化;rt-qpcr检测cat和sod2基因的表达变化,探究限饲和补充l-arg对湖羊子宫内膜抗氧化水平的影响。
2. 体外细胞培养试验,对湖羊子宫内膜上皮细胞分别添加h2o2和l-arg,收集细胞和上清,通过cck8检测、ros检测和rt-qpcr测定细胞增殖活力水平及氧化应激相关指标变化,探究l-arg对湖羊子宫内膜上皮细胞增殖活力及氧化-抗氧化水平的影响。
3. 研究的方法与方案
研究方法与试验方案:
本课题通过饲养试验和体外细胞培养试验探究l-arg对湖羊子宫内膜上皮细胞氧化-抗氧化能力和细胞增殖活力的影响。
1. 饲养试验
4. 研究创新点
1.探究L-Arg对诱导发生氧化应激的湖羊子宫内膜细胞抗氧化水平和增殖活力的影响及机制。
2.本项目将为通过调节营养来改善绵羊子宫生理活动提供理论依据。
5. 研究计划与进展
研究计划:
2019.10-2019.11 完成相关文献资料的查阅,实验方案设计以及实验材料的准备;
2019.12-2020.01 建立诱导h2o2细胞氧化应激模型,确定h2o2使用浓度,参考相关文献确定本试验使用的h2o2及l-arg浓度,完成实验设计,进行ros超氧化物含量测定,处理细胞并收集细胞和上清用于后期检测;
