1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.研究意义1.1流感病毒分型及其致病性流感病毒属正粘病毒科正粘病毒属分节段的单股负链rna病毒病毒基因组约13.6 kb，分为8 个大小不等的独立片段。
8个基因组片段编码流感病毒的结构蛋白（pb1、pb2、pa、ha、np、na、m1、m2）和非结构蛋白（ns1、ns2）。
因其核蛋白（np）高度保守[1]，故可将流感病毒分为 a、b、c 三型。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标1.1 获得h9n2亚型禽流感病毒（aivs）nj01株的保真全基因片段（pb2、pb1、pa、ha、np、na、m、ns）用rt-pcr对h9n2 aivs nj01株的pb2、pb1、pa、ha、np、na、m、ns基因片段进行扩增，将扩增的基因片段通过ta克隆连接到克隆载体，对克隆载体进行核酸序列测定，筛选出保真克隆，为h9n2 aivs反向遗传操作平台的构建提供保真序列。
1.2 np基因的原核表达将h9n2 aivs nj01株的np基因保真克隆连接到到原核表达载体，转化至大肠杆菌，然后进行诱导表达，为h9n2 aivs nj01株np蛋白单克隆抗体的制备提供免疫抗原。
1.3 np蛋白的免疫保护性研究用所得np蛋白对10日龄鸡进行免疫，对每组鸡于免疫前、免疫后和攻毒后每周采集其翅静脉血,分离血清,置一20℃保存备用。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法1.1 pb2、pb1、pa、ha、np、na、m、ns片段全长的扩增根据病毒8个基因节段的保守序列，设计反转录引物。
用trizol法从尿囊液中提取病毒rna，用反转录试剂盒、以病毒rna为模板获得cdna。
根据pb2、pb1、pa、ha、np、na、m、ns片段的保守序列设计引物，pcr全长扩增上述片段。
4. 研究创新点
将h9n2 aivs nj01株扩增的基因片段通过ta克隆连接到克隆载体，对克隆载体进行核酸序列测定，筛选出保真克隆，可以为h9n2 aivs反向遗传操作平台的构建提供保真序列。
在原核表达系统中高效表达np基因，可以h9n2 aivs nj01株np蛋白单克隆抗体的制备提供有效的免疫抗原。
对诊断试剂的研发和疫苗的研究有非常重要的意义。
5. 研究计划与进展
第一阶段（2017.92017.10）学习实验室操作规范，完善实验设计、熟悉相关操作。
第二阶段（2017.112017.12）完成对h9n2 aivs nj01株pb2、pb1、pa、ha、np、na、m、ns的克隆和基因测序比对，拿到阳性质粒。
第三阶段（2018.22018.4） 对h9n2 aivs nj01株np基因进行蛋白表达。
