1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
在实际生产中，热应激导致猪生长、繁殖性能降低，肉品质下降，给养猪业带来严重的经济损失。
卵母细胞是母猪繁殖功能的最终执行者，它的质量好坏直接决定了母猪繁殖性能的高低。
有关热应激对卵母细胞质量的影响的相关研究很多，主要的机制涉及激素代谢、细胞凋亡等方面[1-2]。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标：本项目针对热应激导致母猪生产效率下降的实际问题，以卵泡颗粒细胞为研究对象，探究热应激状态下猪卵泡颗粒细胞凋亡水平的变化及其gr参与的调控机制，扩展对gr功能的认识，为缓解热应激导致的母猪繁殖障碍的治疗提供思路。
2.研究内容：本项目研究热应激状态下猪卵泡颗粒细胞凋亡水平的变化及其gr参与的调控机制。
研究采用从屠宰场采集的猪的卵巢，抽取卵丘卵母细胞复合体（cocs），并分离颗粒细胞。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法：1.1颗粒细胞凋亡水平的测定：采用annexin v-fitc 细胞凋亡检测试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡1.2 gr表达检测：采用常规的dna、rna、蛋白质的定量研究手段，如pcr，rt-pcr，western blot，检测gr mrna变体和蛋白亚型。
2.技术路线：见附件3.实验方案：3.1 猪颗粒细胞的原代培养（1）选取并采集健康商品母猪卵巢，置于37 ℃生理盐水运回实验室。
用g25号针头注射器抽取卵泡液（避开血管）；（2）将收集的卵泡液于1000 rpm离心5 min，弃上清；（3）用含1%青链霉素（100u/ml）的1*pbs重悬清洗细胞，1000 rpm离心5 min，弃上清，该步骤重复两次；（4）用含15% 胎牛血清和1%青链霉素的dmem/f12完全培养液重悬细胞，加入装有预热培养基的培养瓶或培养皿中， 置于37.5 ℃、5% co 2条件下培养。
4. 研究创新点
母猪繁殖力下降涉及方方面面的因素，要找出问题的关键点非常困难。
本项目以雌性繁殖中的重要功能细胞卵泡颗粒细胞为研究对象，以能介导应激、调控多种基因表达的gr为研究对象，探讨gr介导热应激导致母猪卵泡颗粒细胞凋亡水平改变的机制。
猪卵泡颗粒细胞gr的表达以及对颗粒细胞凋亡水平的调控机制这些内容尚属研究空白。
5. 研究计划与进展
本项目拟在三个月内完成。
第一个月：阅读大量资料，学习实验技能；采集卵泡颗粒细胞并进行原代培养；进行热应激实验和热应激与gr抑制实验，检测颗粒细胞凋亡水平，验证gr在颗粒细胞热应激中的介导作用。
第二个月：测定gr mrna的表达量和蛋白亚型；分析数据；准备中期报告，撰写论文。
