1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
大肠杆菌不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxin, lt）是肠产毒性大肠杆（enterotoxigenicescherichia, etec）分泌的一种热不稳定肠毒素。
lt是ab5型结构的杂合寡聚蛋白,约86 kd。
其中a亚基（lta）约28 kd ,5个相同的约11.5 kd的b亚基（ltb）彼此以共价键结合形成以a亚基为中心的环状五聚体，a亚基和b亚基共同构成六聚体蛋白。
2. 研究的基本内容和问题
目标：克隆出大肠杆菌不耐热肠毒素ltb的基因，并表达纯化。
纯化的蛋白可用作免疫佐剂。
内容：克隆ltb基因，原核表达，纯化蛋白。
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法基因的克隆，PCR产物消化和电泳，原核表达载体的构建，重组质粒在原核细胞中的表达，表达产物Western-blot检测，表达产物的纯化技术路线2. 实验方案及可行性分析2.1 实验方案本实验通过PCR得到LTB基因，测序结果显示突变序列与预期一致。
通过NdeI和BamHI双酶切将目的基因与pET32a表达载体连接,并使其在BL21菌株中分别成功表达，表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳和Western-Blot鉴定确认为目的蛋白，通过镍柱纯化蛋白.可行性分析该实验有很多研究者成功的经验，都是基本的实验操作，难度不大。
4. 研究创新点
1. 特色想要lt成为大量生产的免疫佐剂，必须解决其毒性问题，许多研究者将目光放在定点突变a亚基使得lt毒性减小。
本实验着眼于将ltb的基因提取出来，原核表达并纯化出蛋白，为ltb作为免疫佐剂提供了新思路。
2. 创新之处提取出ltb基因并原核表达，提纯蛋白。
5. 研究计划与进展
1. 研究计划9-10月克隆基因，PCR产物的消化和电泳。
10-11月原核表达载体的构建11-12月重组质粒在原核细胞中的表达和纯化蛋白2. 预期进展在12月检测完所有样品并且收集到所需数据并进行数据分析。
