香菇多糖的醇沉分级开题报告

1. 研究目的与意义

香菇（lentinus edodes）又名香蕈、香菌，侧耳科担子菌，世界名贵食用兼药用菌之一，来源广、易培植。香菇有多种有效药用组分，尤其是含有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成功能的香菇多糖（lentinan）和能增强人体免疫力的水溶性木质素这两种药用生理活性物质，因而受到人们的广泛重视。香菇多糖以β-d（1→3）连接的吡喃葡聚糖为主链，侧链是由β-d（1→6）和β-d（1→3）相连的d-葡聚糖组成，侧链上也含有少数内部β-d（1→6）键。香菇多糖为白色或棕黄色粉末，对光和热稳定，具吸湿性相对分子质量较大，部分能溶于水，在水中的溶解度随分子质量增大而降低，水溶液为中性，不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂。香菇多糖毒副作用低、药效高，具有良好的抗肿瘤和免疫调节作用。研究发现香菇多糖可以激活很多免疫细胞如t细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞，增强免疫细胞的吞噬能力来杀灭人体中的癌细胞，同时对迁移的癌细胞也有作用。此外，香菇多糖还有抗感染作用，多糖的分子表面可以与病原体发生黏附作用，防止病原体与正常细胞表面糖分子结合，从而阻断其感染途径。随着人们对香菇多糖的深入研究，更多的作用将会被发现。

香菇多糖提取时，无论是采用常规的热水浸提法、酸提取法、碱提取法，还是新型的超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶解法等，最后都要通过醇沉来获得多糖。醇沉是依据分子质量大小不同来进行分离纯化的，所以不同体积分数的乙醇沉淀（即分级醇沉）得到的多糖的组成和得率是不同的。很多研究显示，多糖的分子质量和组成与其生理活性有着密切的关系，这些不同的多糖组分的抗氧化性、抑菌活性是不同的。探寻合适的乙醇浓度，以获得具有较高抗氧化性和抑菌活性的醇沉多糖组分，将有助于提取高活性的香菇多糖，也为进一步明确香菇多糖的生理作用奠定基础。

越来越多的研究发现很多食用菌具有清除自由基，提高抗氧化酶的活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。食用菌多糖能够直接清除自由基，络合产生活性氧必须的金属离子，促进sod从细胞表面释放，减少脂质过氧化产物丙二醛（mda）的生成量，增加超氧化物歧化酶（sod）、谷胱甘肽过氧化物酶（gsh_px）活性等，发挥重要的抗氧化、防衰老作用。常用的抗氧化活性指标有总还原力、羟自由基清除能力和清除超氧阴离子自由基能力。常用食用菌如茶树菇、杏鲍菇、蟹味菇多糖在测试总还原力时发现：随着多糖浓度的提升，样品的还原力越强，还原力大小依次为杏鲍菇茶树菇蟹味菇。在对羟自由基的测试中则发现：在所选浓度范围内，随着多糖浓度的提升，羟自由基的能力趋于相同，茶树菇去自由基能力最强，杏鲍菇与蟹味菇差异不明显。在对清除超氧阴离子能力测试中则发现：在所选浓度范围内，清除朝氧阴离子自由基能力随多糖浓度提升而呈上升趋势，茶树菇和杏鲍菇清除能力较强，而蟹味菇的清除能力则较弱。

2. 研究内容和预期目标

研究内容包括：

（1）采用超声波辅助提取法提取香菇多糖，采用不同浓度乙醇对香菇多糖进行分级醇沉；

（2）采用苯酚-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法测定醇沉分级的香菇多糖的质量。

3. 研究的方法与步骤

香菇干品用粉碎机打粉→80目过筛→石油醚除脂（震荡过滤提取）→烘箱烘干 备用

1、查阅资料得到香菇多糖的粗提在超声波功率70%、超声波时间30min、料液比1:25、水浴温度70℃、水浴时间90min条件下可以获得最大多糖得率。用苯酚硫酸法测总糖，dns法测还原糖。

将脱脂后的香菇粉末以1:25的比例混合摇晃溶解后，在瓶口包裹保鲜膜后放入超声波清洗机中进行超声，设定时间30min，功率70%，超声结束后转入70℃水浴锅内进行加热浸提，水浴时间90min，冷却后分装离心管，4000r/min，15min离心，取上清液。

4. 参考文献

[1]张敏瑜，齐延林，杨宏华，言章雪，汪波.香菇多糖提取工艺优化及其抗氧化与抑菌功效研究[j].中国农学通报，2016,32（11）：39-42.

[2]姚磊, 王静, 赵海田. 香菇多糖生物活性研究进展[j]. 中国甜菜糖业,2004(3):27-30.

[3]吕国英，范雷法，张作法，潘慧娟.香菇多糖研究进展[j].浙江农业学报，2009,21（2）：183-188.

5. 计划与进度安排

1.1-4周：查阅文献，制定实验方案，撰写开题报告，学习软件使用；

2.5-6周：开始实验准备工作，进行预实验，熟悉实验方法；

3.7-10周：使用超声波辅助提取法从香菇子实体中提取胞内多糖，利用不同浓度的乙醇对香菇多糖进行分级醇沉，并测定各自的质量；