铬污染对小麦幼苗的生理指标的影响开题报告

 2022-03-11 09:03

1. 研究目的与意义

小麦是小麦系植物的统称,是单子叶植物,是一种在世界各地广泛种植的禾本科植物,小麦是人类的主食之一,全世界有43个国家,有35%-40%的人口以小麦为主要粮食。2010年小麦是世界上总产量位居第二的粮食作物(6.51亿吨),仅次于玉米(8.44亿吨)。

小麦的颖果磨成面粉后可制作面包、馒头、饼干、面条等食物;发酵后可制成啤酒、酒精、白酒(如伏特加),或生质燃料。小麦富含淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、钙、铁、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素a及维生素c等。

铬对植物生长有刺激作用,可提高收获量。但如含铬过多,对人和动植物都是有害的。

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2. 研究内容和预期目标

重金属铬对植物生理生化过程的影响主要表现在对光合过程的影响,以小麦幼苗为材料,用一系列浓度梯度的k2cr2o7溶液对小麦幼苗进行处理,测定小麦幼苗的这些逆境生理指标:叶绿素和脯氨酸含量,可溶性糖和mda(丙二醛)含量和根系活力、光合生理指标的测定以及sod、pod活性。

重金属铬胁迫下麦幼苗根系的可能出现损伤 ;小麦幼苗受到损伤的明显症状之一是叶片叶绿素含量下降 ,蛋白质含量降低,从而使植物失绿,产生毒害现象。除此之外,通过梯度浓度实验,分析胁迫生长条件下小麦幼苗的mda含量和可溶性糖含量,从而找到铬胁迫环境下,小麦幼苗不同时期所能适应生长的最大浓度。

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3. 研究的方法与步骤

3.拟采用的研究方法、步骤

本试验采用随机区组试验,设置7个K2Cr2O7浓度水平,即0(对照),0.075%,0.150%,0.225%,0.300%,0.375%,0.450%,每个浓度水平设置10个培养皿,每个培养皿播种50粒。

1、出芽率播种后5日和10日按照下列公式计算出苗率

出苗率=实际出苗数/供试种子数×100%

0

0.075%

0.150%

0.225%

0.300%

0.375%

0.450%

5d

10d

2、叶绿素含量的测定

原理及方法:叶绿素a和叶绿素b的吸收曲线有重叠又有差异,可根据Lambert-Beer定律,通过代数方法,计算出一种组分由于另一种组分存在时对OD值的影响,最后分别测得两种组分的含量。

实验步骤:①色素的提取:取叶片0.5g放入研钵中加纯丙酮5mL,少许CaCO和石英砂,研磨成匀浆,再加80%丙酮5mL,离心,离心后弃沉淀,上清液用丙酮定容至20mL.

②测定OD值:取1mL提取液,加入丙酮4mL稀释后转入比色杯中,以80%丙酮为对照,分别测定663nm,645nm处的OD值

③计算

④将结果记录于表中:

对照

0

0.075%

0.150%

0.225%

0.300%

0.375%

0.450%

663nm

645nm

⑤结果分析

3、Pro含量的测定

原理及方法:在酸性条件下,茚三酮与脯氨酸的反应生成红色化合物,其含量与色度呈正比,可用分光光度计测定,此法有专一性。

实验步骤:①准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g,分别置大管中,然后向各管分别加入5ml3%的磺基水杨酸溶液,研磨提取,匀浆移至离心管中,在在沸水浴中提取10min,(提取过程中要经常摇动),冷却后3000r/min离心10min,取上清液待测。

②制作标准曲线:用100μg/ml脯氨酸配制成0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μg/mL的标准溶液。取标准溶液各2mL,加2mL3%磺基水杨酸,2mL冰醋酸和4mL2.5%酸性茚三酮试剂于具塞试管中,置沸水浴中显色1h,冷却后加入4mL甲苯,盖好盖子于漩涡混合仪上振荡0.5min,静置分层,吸取红色甲苯相,于波长520nm处测定OD值,以OD值为纵坐标,脯氨酸质量浓度为横坐标,绘制标准曲线。

③各取2mL上清液,分别加入2mL蒸馏水,冰醋酸和4mL2.5%酸性茚三酮,与上述制作标准曲线一样进行显色,萃取和比色,最后从标准曲线查得脯氨酸含量。

④将结果记录于表中:

0

0.075%

0.150%

0.225%

0.300%

0.375%

0.450%

5d

10d

4、根系活力的测定

原理及方法:TTC是一种氧化还原色素,溶于水中呈无色溶液,但可被根系细胞内的琥珀酸脱氢酶等还原,生成红色的不溶于水的TTF,因此,TTC还原强度可在一定程度上反映根系活力。

实验步骤:①标准曲线的制作:配制0,0.04%,0.03%,0.02%,0.01%,0.005%的TTC溶液,各取5ml放入刻度试管中,各取5ml乙酸乙酯和少量Na2S2O4(2mg),充分震荡后产生红色的TTF,转移到乙酸乙酯层,待有色液层分离后,补充5ml乙酸乙酯,震荡后静置分层,取上层乙酸乙酯液,以空白作为对比,在分光光度计上于485nm处测定各溶液的OD,绘制标准曲线。

②TTC还原量的测定:称取根样品2g,浸没于盛有0.4%TTC和66mmol/L磷酸缓冲液(pH=7)的等量混合液10mL的烧杯中,37℃保温3h,加入1mol/L硫酸2mL终止反应。取出根,提取TTF,分光光度计测定OD。

③计算:TTC还原强度=TTC还原量(g)/根重(g)×时间(h)

④将结果记录于表中:

浓度

0

0.075%

0.150%

0.225%

0.300%

0.375%

0.450%

OD

TTC还原量

TTC还原强度

⑤结果分析

5、可溶性糖和丙二醛(MDA)含量测定

原理及方法丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标,在酸性和高温度条件下,可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮),其最大吸收波长在532nm。

试剂1:质量分数为10%三氯乙酸(TCA);

2:质量分数0.6%硫代巴比妥酸:先加少量的氢氧化钠(1mol·L-1)溶解,再用10%的三氯乙酸定容;

方法1:MDA的提取称取剪碎的试材1g,加入2mll0%TCA和少量石英砂,研磨至匀浆,再加8mlTCA研磨,匀浆在4000r/min离心10min,上清液为样品提取液。

2:显色反应和测定吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水),加入2ml0.6%TBA溶液,混匀物于沸水浴上反应15min,迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。

对照

0

0.075%

0.150%

0.225%

0.300%

0.375%

0.450%

532nm

600nm

450nm

C1=11.71D450C1——可溶性糖的浓度(mmol/L)

C2={6.45(D532-D600)-0.56D450}NW-1C2——MDA的浓度(·umol/L)

D450、0532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。

N:提取液总体积(ml)W:植物组织鲜重

⑤结果分析

6、光合生理指标的测定

用Li-6400(Li-cor)光合仪对小麦进行光合生理指标的测定。相同条件下(同一光照度、温度、CO2)的光合生理指标的测定:在晴好天气的9∶30采用Li-6400便携式光合仪测定净光合速率(Pn)、气孔导度(Cs)、胞间CO2浓度(Ci)等光合生理指标。光强为1000μmol/(m2·s),CO2浓度约为350μmol/mol,温度为25℃左右。

浓度

净光合速率

气孔导度

胞间CO2浓度

0

0.075%

0.150%

0.225%

0.300%

0.375%

0.450%

4. 参考文献

[1]魏学玲,史如霞,杨颖丽等cd2 胁迫对小麦幼苗生理生化特性的影响(西北师范大学生命科学学院,兰州730070)

[2]黄斌,张达等铬污染对李氏禾生理指标的影响(1.桂林理工大学化学与生物工程学院,广西桂林541004;2.东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030)

[3]王美娥,周启星重金属cd、cu对小麦幼苗生理生化过程的影响及其毒性机理研究

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5. 计划与进度安排

合理安排实验进度:

1.2022-11-12接受任务;

2.2022-02-21—2022-03-15完成开题准备;

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