1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
锌元素是生物体必须的一种微量元素,在生物体内发挥重要作用。
锌的生物学作用可以概括为调节、结构和催化三方面,且都与基因表达的调节有关[1],由此我们认为对生殖系统发育的重要作用也通过相关机制发挥作用。
调节方面,其参与性激素合成,下丘脑-垂体-性腺轴等影响生殖系统发育和功能以及维持雄性动物生精功能的作用已经被充分证实,同时也有研究表明,锌元素和锌元素转运蛋白在小鼠卵泡和黄体中广泛分布,说明锌元素水平对于卵巢的正常功能有至关重要的作用[2]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标及内容探究饲喂不同锌元素水平日粮对小鼠卵泡发育的影响,验证缺锌日粮条件下小鼠可能出现的卵泡发育障碍和高锌日粮条件下可能出现的有利或不利效应。
内容包括实验设计,小鼠的饲喂和采样,小鼠卵泡切片制作,he染色,免疫组化,卵泡发育情况的观察以及一些后续实验。
拟解决的关键问题1.日粮锌元素水平是否影响小鼠卵泡的正常发育?2.日粮中高水平锌元素对小鼠的卵泡发育情况是不利还是有利影响?
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法包括he染色的形态学观察,免疫组化观察相关蛋白质的表达情况。
试验方案试验共15只未性成熟21日龄小鼠,分为3组,每组5个重复。
zo小鼠颗粒饲料 za小鼠颗粒饲料 zd小鼠颗粒饲料高锌组(zinc overdose,zo) - -对照组(zinc adequacy,za) - -缺锌组(zn deficiency,zd) - - 1.按试验设计饲喂不同饲料两周至性成熟,采集小鼠血液,卵巢等组织,血液3000r/min离10min心后取上清,-80℃冻存,卵巢组织置于多聚甲醛常温下保存。
4. 研究创新点
现行研究大多侧重锌元素对雄性小鼠繁殖机能的作用,很少有探究锌元素和雌性小鼠卵泡发育的研究,本实验旨在探究日粮中锌元素水平对雌性小鼠卵泡发育的影响,比较研究缺锌和高锌条件下小鼠卵泡发育的不同之处,并在时间条件允许的情况下,探究锌元素和PARP1表达情况之间的关系,为实验室后续试验提供基础理论依据。
5. 研究计划与进展
研究计划3-4月 按试验设计要求饲养实验小鼠4月下旬 采样,制备卵巢石蜡切片5月上旬 he染色观察,免疫组化,拍照并筛选5月下旬 完成毕业论文预期进展1.与对照组比较,低锌组小鼠卵泡发育受到抑制,各级卵泡数量减少,闭锁卵泡数量增加2.与对照组比较,高锌组小鼠卵泡发育正常,且各级卵泡数量显著增加,闭锁卵泡数量显著减少,且卵巢发育健康。
3.高锌组小鼠的体重,健康状态均优于低锌组。
4.高锌组可能出现潜在的卵泡发育抑制现象。
