D型流感病毒反向遗传系统感染性克隆的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义：

流感病毒一直是可感染各种鸟类、哺乳动物以及人的主要呼吸道病原，在爆发或季节性流行期间会引起急性呼吸道疾病，严重威胁着养殖业的发展和人类的健康。最近的研究鉴定了正粘病毒科中的一个新属：d型流感病毒(influenzad virus, idv)。首先在具有流感样症状的猪中鉴定出，被归类为与先前表征的人类丙型流感病毒远远相关的d型流感病毒（idv），且与人类丙型流感病毒（icv）进化关系最为接近。d型流感病毒可以感染多种哺乳动物，并在人的血清中检测到了idv的抗体。进一步研究发现牛是idv的天然宿主，然而关于其在人类中引起疾病的可能性知之甚少。目前，反向遗传学操作技术已成为人类应对各种病毒、尤其是流感病毒的最主要手段之一，其在流感病毒生物学研究(阐明病毒分了致病基础、研究基因组的结构与功能、病毒与宿主相互作用及流感疫苗研究中发挥了极大的作用。迄今为止，还没有基于质粒的拯救d型流感病毒的反向遗传系统报道。本研究课题着力于构建d型流感病毒的反向遗传操作系统，为研究新型d型流感病毒的生物学特性、结构与功能的关系等方面的研究奠定了基础，对流感的防控和新型疫苗研制具有重要意义。

2.国内外研究概况、应用前景等：

2011年，美国中西部地区，从流感样症状的临床病猪中分离出类似c型的流感病毒[1]。随后，从美国，墨西哥，亚洲（中国，日本）和欧洲（法国，意大利）的其它地区分离出一种非常相似的病毒[2-5]。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标：遗传进化分析国内外d型流感病毒的流行状况，为d型流感病毒的防控提供参考；构建d型流感病毒的反向遗传操作系统，为阐明该型病毒致病的分子基础、揭示病毒基因组的结构与功能、发展病毒载体及流感疫苗研究奠定坚实的基础。

2.内容：

1）从数据库influenza research database(ird)下载d型流感病毒基因组数据，遗传进化分析。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法：

1）从数据库influenza research database(ird)下载d型流感病毒基因组数据，基于d型流感病毒主要的表面抗原hef片段基因数据，应用clustalx2进行序列比对，用mega6构建进化树，遗传进化分析国内外d型流感病毒流行趋势和抗原分化状况。

2）d型流感病毒反向遗传载体质粒的构建

4. 研究创新点

遗传进化分析国内外d型流感病毒的流行状况，为d型流感病毒的防控提供参考。

迄今为止，还没有基于质粒的拯救d型流感病毒的反向遗传系统报道。

为研究新型d型流感病毒的生物学特性、结构与功能的关系等方面的研究奠定了基础，对流感的防控和新型疫苗研制具有重要意义。

5. 研究计划与进展

（1）2018年09月～2018年10月：收集实验材料，查阅文献，为试验做准备；

（2）2018年10月～2018年12月：载体构建，病毒的拯救；

（3）2019年01月～2019年03月：整理试验数据，发表文章，撰写论文。