一株新型鞘氨醇单胞菌FZ的分离、鉴定及其培养条件优化开题报告

 2022-02-07 20:46:33

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

鞘氨醇单胞菌属( sphingomonassp.)属于变形菌门(proteobacteria)的 α-4-亚门,细胞膜组成中含有鞘糖脂,是典型的好氧,化能自养,革兰氏阴性,杆状,通常菌落呈黄色。结冷胶是通过少动鞘脂单胞菌深层通气发酵方法生产的一种新型的微生物胞外多糖。作为一种微生物食用胶,已有40多年发展历程。它是继黄原胶之后,现在已经能用在食品工业上的微生物代谢胶。结冷胶具有很好的耐酸、耐碱、稳定、高效、无毒、发酵生产周期短、不受天气和地理环境的影响、凝胶能力强、透明度高、耐酸范围广、稳定性强等特点,自从20世纪80年代被生产出来以后受到很多行业的欢迎。

虽然目前我国在结冷胶的研究与生产上已初具规模,但与美国相比,仍在规模和产量上都还有较大差距。结冷胶作为一种极具发展潜力的微生物多糖,其需求量 逐年增长。由于其生产原料价格低廉易得,而自身价格较高,极具商业价值和市场前景。近年来,结冷胶的相关研究已经取得了重大的进展,结冷胶生物合成途径的研究及其与其他类似微生物多糖的分析比较,使我们更好地理解了结冷胶的生物合成调控瓶颈。

现今结冷胶的研究、生产、开发已经初具规模,结冷胶的产品开发已经开始显露头角,但是很多方面仍旧存在非常广阔的提升发展空间。所以在科研研究方向,如何培养、筛选出新的具有高产、低耗、无污染、易培养等优点的优质菌株,是现在有关结冷胶方向的一个重大亟待解决的问题。

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2. 研究的基本内容和问题

1.分离出纯种性状功能良好的菌株。

2.对分离出的菌株进行生理生化实验(淀粉水解实验、v-p实验、明胶液化实验、革兰氏染色、接触酶实验、产硫化氢实验)。

3.菌株的系统发育分析。

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3. 研究的方法与方案

本实验通过将得到的细菌培养物进行纯培养,分理出潜在目的菌株。采用稀释涂布平板法,获得纯培养。选取培养基上长势良好的菌株作为目的菌株。对该菌株进行16s rrna扩增与基因组dna提取,并进行菌株的系统发育分析。利用得到的基因序列在ncbi确定种属,利用clustal利用邻接法nj法构建nj进化树。对分离出的菌株进行生理生化实验,如淀粉水解实验、v-p实验、明胶液化实验、革兰氏染色、接触酶实验、产硫化氢实验。最后探究该菌株的最适生长条件及摇瓶发酵的条件优化其中在最是氮源确定中,利用dns法测量多糖含量。dns即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下,二硝基水杨酸(dns)与还原糖发生氧化还原反应,生成3-氨基-5-硝基水杨酸,该产物在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量的。

细菌的筛选:采用稀释涂布平板法,将过筛后的土壤制成10-4, 10-5, 10-6三个浓度梯度稀释液,涂布到lb、lb加土、wsa、wsa加土培养基上,30℃培养5d,随机挑取进行平板划线纯化,反复进行3次,直至获得纯培养。

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4. 研究创新点

1.先从菌株系统发育进行分析,随后进行生理生化实验探寻菌株的特性,最后对该种菌株的培养进行较为全面的培养条件研究。

2.在确定菌株培养的最适氮源,利用DNS法进行判定依据。

5. 研究计划与进展

2019.11.26—2019.12.20 进行菌株的筛选获得纯培养

2019.12.21—2020.01.15 菌株的系统分析

2020.04.30—2020.05.08 菌株的生理生化实验

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