拟南芥叶片荧光强度分布统计与自动条件筛选开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义dna甲基化主要指在胞嘧啶的5号碳原子位上增加一个甲基，形成5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine, 5-mc）的过程，是一种重要的表观遗传机制，保守、稳定而可逆[1]，参与了转座元件（transposable element, te）沉默、x染色体的失活、基因组稳定、基因组印记等事件[2]。

在启动子区域的dna甲基化能够调控基因表达，并在植物和动物的生长发育中具有重要作用。

如在植物中，可调控叶片的发生、开花时间、花器官分化、受精和胚的生成[1]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

鉴定一个拟南芥dna去甲基化相关的基因，并初步研究其功能。

3. 研究的方法与方案

研究方法

4. 研究创新点

拟南芥中图位克隆技术寻找目标基因的技术十分成熟。已经报道的用于拟南芥去甲基化相关突变体的遗传筛选系统有：pro35S∷NPTII,proRD29A∷LUC, pro35S∷SUC2, pro2× 35S∷HPTII。但是这些筛选系统筛选得到的大多是效应强的因子，对效应较弱的因子缺乏敏感度（即，筛选阈值过高），因此容易发生筛选缺漏。本课题使用一套新的新的遗传筛选系统——2×35S启动子驱动的LUC转基因亲本系，2×35S：：LUC。在转基因植株中选择高荧光、在35S启动子上发生中度甲基化、RDR6突变背景的株系作为亲本系。通过该系统已经筛选得到了几个已知的参与DNA去甲基化过程的蛋白因子，如ROS1, IDM1。证明其筛选可靠性。同时也已筛选出数个新的突变体。

5. 研究计划与进展

研究计划

4.21~5.21：pcr 凝胶电泳，分析重组率，缩小区间

5.21~6.1：使用bac克隆筛选cdna文库