溶藻菌短短芽孢杆菌B15的发酵条件优化开题报告

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

3.1研究方法

（1）将指数期铜绿微囊藻接入到新鲜BG11培养基中，置于25℃光照培养箱，光照强度2500Lux，光暗比（12h/12），培养；

（2）将细菌接种到液体牛肉膏蛋白胨培养基（1L：3g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，PH7.5，200rpm，过夜即细菌种子液）；

（3）细菌发酵液（4℃，8000g，10min），取上清液，0.22um滤膜过滤除菌即得无菌滤液；

（4）用流式细胞仪进行计数，测定抑藻率；

3.2技术路线

3.3 实验方案

3.3.1 藻种细菌种子液的培养和无菌滤液的制备

（1）将指数期铜绿微囊藻接入新鲜BG11培养基中，置于25℃光照培养箱，光照强度2500Lux，光暗比（12h/12），培养备用；

（2）将细菌接种到液体牛肉膏蛋白胨培养基（1L：3g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，PH7.5，200rpm，过夜即细菌种子液）；

（3）细菌发酵液（4℃，8000g，10min），取上清液，0.22um滤膜过滤除菌即得无菌滤液，备用；

（4）按体积比1%将种子液加入到配置的培养基中，200rpm/min，30℃，培养48h，每天摇晃三次。提取300ul加入到20mL起始浓度1.0*10⁶藻液；

（5）公式：抑藻率（%）=（C对照-C处理）/C对照*100%。

3.3.2 不同碳源对B15溶藻效果的影响

（1）以蛋白胨作为氮源，加入10g/L不同碳源（蔗糖、麦芽糖、淀粉、麸皮和酵母提取物），考虑不同碳源对菌株溶藻效果的影响。

（2）将最佳碳源按不同质量浓度（5、10、15、20、25g/L）测定菌株B15溶藻效果的影响，确定出最佳的质量浓度。

3.3.3 不同氮源对菌株B15溶藻效果的影响

（1）在确定出最佳碳源的基础上，进一步研究不同氮源（10g/L）对菌株溶藻效果的影响。

氮源：蛋白胨、硫酸铵、硝酸钾、酵母提取物、牛肉膏、玉米面、黄豆粉和尿素；

（2）将最佳氮源按不同质量浓度（5、10、15、20、25g/L）测定菌株B15溶藻效果的影响，确定出最佳的质量浓度。

3.3.3 培养基优化正交试验

选取上述测定出来的氮源和碳源，将这些元素进行三个水平的正交试验。选取出溶藻效果最佳的培养基组合。选取培养基配方和最佳培养基组合进行发酵试验，确定最优培养基组合。

3.3.4 培养条件的单因子试验

采取上述测定的优化培养基配方，分别研究菌株B15溶藻效果达到最大值时的培养温度、培养基初始pH值、摇床转速、接种量和装量液。

（1）培养温度的设定：25℃、28℃、30℃、33℃、35℃和37℃；

（2）培养基初始pH值的设定：pH值5、6、7、8、9；

（3）摇床转速的设定：50、100、150、200、250rpm/min；

（4）接种量的设定：1%、2%、3%、4%、5%；

（5）装液量的设定：30mL、40mL、50mL、60mL、70mL。

3.4 可行性分析

（1）研究内容集中、目标明确、研究方法可靠。

铜绿微囊藻生长周期短，繁殖速度快，实验室条件下培养较易获得。

（2）研究员基础扎实

本项目的研究成员有着扎实的专业知识与实验技能，有着对科研的热情及认真负责的态度，这些为本项目的完成提供了保证。

(3) 研究条件优良。

本实验室已经具备了开展本研究的常规仪器设备。这些为本项目的完成提供了硬件方面的保证。