1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1 本课题意义
动物神经毒素(animal neurotoxin)的研究对生物神经、生理及药理学的研究与发展具有重要意义，一些已探明组织结构和作用机制的动物神经毒素，已经成为研究离子通道、神经突触及神经递质等神经生物学问题的重要工具。如强效阻断钠离子通道的河豚毒素、蝎毒素，以及与神经递质受体竞争性结合的α-银环蛇毒素等等。而蜘蛛则成为近年来动物神经毒素最重要的来源之一。蜘蛛神经毒素对na 、k 、ca2 等离子通道的相关作用机制，及其与ach受体的密切关系，更使之成为研究相关受体蛋白及神经细胞调控的新型工具，在神经、生理及药理学领域展现出了广阔的应用前景。
本课题中，我们对蛾蝇转录组进行分析并从中得到一条多肽序列，通过blast比对发现该多肽与蜘蛛神经毒素agatoxin具有极大的相似之处。我们将通过smart方法获得该多肽的全长cdna并克隆该基因，随后构建出该毒素多肽的原核表达载体，为后续的生理活性研究与应用奠定基础。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究目标
首先通过trizol法得到蛾蝇的总rna，再通过smart方法获得该多肽的全长cdna序列，之后通过pcr克隆该基因，最后构建其大肠杆菌原核表达载体。
2 研究内容
3. 研究的方法与方案
1 研究方法
1.1 蛾蝇总rna的提取
将采回的蛾蝇8到10只放入液氮冷却好的研钵中，充分研磨后将其粉末转移到两个1.5ml ep管中，每个ep管各加1ml trizol，立即冰上放置5分钟使组织细胞充分裂解，每2分钟颠倒摇匀一次。加入0.2ml氯仿，30s的上下剧烈震荡，在冰上放置3分钟，14000rpm，4℃离心15分钟。将颜色较淡的上清液小心转移到无菌1.5ml离心管中，加入500μl预冷好的异丙醇，上下混匀几次，冰上放置15分钟。13000rpm，4℃离心15分钟。倾倒干净上清，75%的乙醇洗两次以除盐。加入700μl 75%的乙醇，将rna沉淀悬浮，颠倒3次，8000rpm，4℃，离心10分钟。超净工作台中吹干，加入20μl h2o溶解。使用电泳及微量分光光度计测定核酸浓度和纯净度。
4. 研究创新点
以往对神经毒素的研究多限于蜘蛛、蜈蚣、蝎子等高毒动物，我们以常见昆虫蛾蝇作为研究对象，通过其叮咬及取食能力，从中发掘出与蜘蛛类似的神经毒素多肽，提供了新的研究方向和材料，同时完善了对蛾蝇生理生化性能的探索。
5. 研究计划与进展
2017年1月-2月：完成神经毒素多肽全长cdna的获得；
2017年3月：完成该多肽基因克隆载体的构建；
2017年4月：完成该多肽基因表达载体的构建；
